LPS诱导HSC增殖与提高其胶原表达水平的细胞模型研究.pdfVIP

2008年12月第46卷第35期 ·基础研究 · LPS诱导HSC增殖与提高其胶原表达水平的细胞模型研究 杨德民t王 健 (1．吉林省吉林中西医结合医院，长春 132011；2．北京中医药大学，北京 100029) 摘【要】目的 建立较为全面反映肝星状细胞活化效应的细胞模型。方法 应用脂多糖刺激体外培养的大鼠HSC。MTI法测 定HSC增殖率。免疫组化法显示 HSC表达 I、Ⅲ型胶原水平，并进行图像分析。结果 LPS明显刺激 HSC的增殖和提高其 I、Ⅲ型胶原表达水平，与对照组比较有非常显著性差异(PO．01o结论 LPS诱导HSC活化模型能够相对全面反映HSC 活化效应。 关【键词】肝星状细胞 ；脂多糖；胶原 中【图分类号1R329．2 文【献标识码】A 文【章编号】1673—9701(2008)35—29—02 DevelopmentofCellularModelofHSC ActivationStimulatedbyLPS YANGDeatinl WANG a谇 1．JilinChineseandWesternMedicineHospital，Changchun132011；2．BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029 fAbstract】Objective TodevelopecellularmodelofHSCactivation．Methods IsolatedratHSCculturedinvitrowasstimulatedwith lipopolysecharide(LPS)．ProliferationofratHSCwasdetectedwithMTItechnique．ExpressionlevelsofcoHagenIandcollagenIIIinratHSC wereshowedwithimmunochemistrytechniqueandanalyzedwithimageanalysissystem．Results LPSsignificandypromotedproliferationele—— vatedexpressionlevelsofcoHagenIandcoHagen IIIinratHSC．Conclusion ModelofratHSC activationstimulatedwithLPScanreflect moreintactHSC activationeffects． K【eyWords】HSC；LPS；Collagen 在肝纤维化形成过程中，肝星状细胞 (hepaticstellatecell， 于含20％胎牛血清的RPMI1640培养基中，在含5％CO：的37~C HSC)的活化对肝纤维化形成起到关键作用。在肝纤维化的研究 培养箱中培养 1～2周 ，消化收获细胞。用含 10％胎牛血清的 中，大量的体外实验研究是利用HSC的体外培养进行研究。因 RPMI1640培养基将细胞调至所需浓度，接种于96孔平底培养 此 ，选择合适的细胞模型对于实验研究具有重要意义。以往的研 板中，细胞数为5X10个 ／孔。培养 12h细胞贴壁后 ，换用含5％ 究多采用PDGF、TGF或 TNF等细胞因子刺激 HSC活化 ，其结果 胎牛血清的RPMI1640培养基，同时加入不同浓度的LPS。LPS终 常不能全面反映HSC的活化效应。本研究试用脂多糖 (1ipopoly— 浓度 分别 为 1．0XIgm／L (LPS1)、0．1g／mL(LPS2)、0．01 L sccharide，LPs)刺激大鼠HSC，探索建立了LPS刺激HSC增殖并 (LPS3)、0．01XIgm／L(LPS4)，分别培养24h、48h、72h。每个浓度设 提高胶原表达水平的细胞模型。 4复孔，MTT法测定细胞增殖率。每组实验动物5只。 MTI法