microRNAs与胰腺癌.pdfVIP

2008年 1O月第 8卷第5期 ChinJPancreatol，Oct—obe · 345 · —r20 ， !：： ： · 讲 座 · microRNAs与胰腺癌 王云锋 高军 李兆中 microRNAs是近期新发现的一类 18～24个核苷酸 、非蛋 方法，并常用来评价其他的miRNAs检测方法的可靠性 。 白质编码的小 RNA家族。在基因转录后水平，通过与靶 2．实时 PCR法：实时PCR也是研究 miRNAs表达及功能 mRNA结合，对基 因的表达起负性调节或基因沉默作用。 的基本方法之一。RT—PCR和Northernblot联合使用，是定量 microRNAs广泛存在于真核生物中，在物种间具有高度的保守 检测~RNAs的经典方法。 性、时序性和组织特异性。在生命活动中对生长 、发育、疾病 3．基因芯片技术 ：这一技术可以有效快捷地同时比较大 等具有十分广泛和重要的作用 。最近研究显示，microRNAs 量基因的表达情况，已在诸多实验室用于microRNAs的研究。 在肿瘤的形成及进展过程中发挥癌基因或抑癌基因的作用。 4．计算机技术：可以预测 microRNAs的靶基因，指导实 — — microRNAs 验。代表网站如：http：／／WWW．microma．o ；http：∥pietar． 、 早在 1993年，Lee等 在研究线虫突变表型时，发现了第 mdc—berlin．de／等。 一 个microRNA(1in-4)，它通过调节靶基因的翻译来调控胚胎 5．遗传学方法：通过人工合成反义 RNA复合物，在体内 发育。随后多个研究小组相继发现了大量类似的RNA，于 与mRNAs竞争结合 miRNAs，从而发挥作用。点突变方法可 2001年统一命名为 microRNAs，2002年获得 《science)杂志十 以直接研究~RNAs与靶基因的相互作用。因为miRNAs上 大科技突破第一名，逐渐成为研究焦点。 有一些 “种子序列”，对于miRNAs和靶基因的结合是非常重 人类microRNAs绝大多数位于编码蛋白质或非编码蛋白 要的，种子序列如果错配，~RNAs对mRNA的调控就会受到 质mRNA的内含子区域，一些microRNAs在基因组中有多个 严重影响，进而影响生物性状。其他研究方法还有转基因、特 位点，也有串联排列的。在细胞核 内由RNA聚合酶Ⅱ或 由 异性引物等。 RNA聚合酶Ⅲ参与形成pri—microRNAs，pri—microRNAs一般为 三、microRNAs与癌症 数千碱基的长度，含有 MGpppG帽子结构和多聚腺苷酸 近几年研究显示，人类不同肿瘤组织 microRNAs的表达 尾 ¨J。pri—microRNAs被核酸内切酶RNaseIll(Drosha)和双 不同。一些microRNAs在肿瘤组织中低表达，大部分发挥抑 链RNA一结合蛋白Pasha(DGCR8)处理成约70个核苷酸的茎一 癌基因的作用 ；相反，一些 microRNAs在肿瘤组织中高表 环结构pre—microRNAs。由RAN—GTP和转运蛋白exportin一5将 达，发挥癌基因的作用。 pre—microRNAs运输到胞质，然后被 RNA聚合酶Ⅲ(Dicer)剪 染色体 13q14点突变是导致慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 切成约 l8～24个核苷酸的双链 microRNAs。双链microRNAs 的重要原因，虽然该区域无蛋白质编码基因，却能识别 miR一 进入RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)中，一条链优先保留 15a和 miR一16．1两个 microRNAs，在 CLL中miR一15a和 rniR一 在复合物中发展为成