N末端的缺失对牙龈卟啉单胞菌FtsZ体外聚合的影响.pdfVIP

484 JournalofOralScienceResearchOct．2008，Vo1．24，No．5 ， · 基础研究论著 · N末端的缺失对牙龈卟啉单胞菌FtsZ体外聚合的影响 于维先 毕文翔 于德珍 (哈尔滨工业大学口腔医学中心 口腔医学及材料研究所 黑龙江 哈尔滨 150090) [摘要] 目的：探讨 N末端的缺失对牙龈卟啉单胞菌FtsZ体外聚合的影响。方法：将质粒pEZ1(PgFtsZ，携带野生 型牙龈卟啉单胞菌 FtsZ的基因)、pYWN1(ZAN01，携带 PgFtsZ的N末端去除了43个保守性氨基酸残基的缺失变 异型PgFtsZ的基因)和pYWN2(ZAN02，携带 Ffsz的N末端去除了205个保守性氨基酸残基的缺失变异型Pg- FtsZ的基因)分别导入 EscherichiacoliBL21(DE3)pLysS中表达，通过 IPTG诱导表达 目的蛋 白质，6mol／L尿素变 性及HiTrapSP层析柱纯化 目的蛋白质，最后通过沉淀法检测 10mmol／L的MgC12、CaC12和MnC1对PgFtsZ、ZAN01 和ZAN02体外聚合的影响。结果：10mmol／L的MgC1、CaC1和MnC1均能诱导PgFtsZ和ZAN01出现聚合反应， 然而 10mmol／L的MgC1：和CaC1：没能引起 ZAN02的体外聚合，而仅有 10mmol／L的MnC1能诱导ZAN02出现 聚合反应，但效果不如PgFtsZ和ZAN01明显。结论：PgFtsZ的N末端的43个氨基酸残基对Mg“、Ca 和Mn 诱 导其体外聚合反应影响不大，而后的162个氨基酸残基在PgFtsZ的体外聚合过程中起着关键的作用。 [关键词] 牙龈卟啉单胞菌 FtsZ 体外聚合 [中图分类号] R781．1 [文献标识码] A [文章编号] 1671—7651(2008)05—o484—03 EffectsofN —terminusDeleted MutantsonAssemblyofFtsZ in PorphyromonasGingivalisin Vitro．YU Wei— xian，BIWen—xiang，YUDe—zhen．StomatologicalCenterofHarbinInstituteofTechnology，Harbin150090 [Abstract] Objective：ToinvestigatetheeffectsofN—terminusdeletedmutantsonassemblyofFtsZinPorphyromonas gingivalisinvitro．Methods：TheplasmidspEZ1(PgFtsZ，containingFtsZgeneofPorphyromonasgingivalis)，pYWN1 (ZAN01，containingN—terminustruncatedmutantgene，missing43residuesfromtheN—terminusofPgFtsZ)，pYWN2 (ZAN02，containingN—terminustruncatedmutantgene，missing205residuesrfomtheN—terminusofPgFtsZ)werein— troducedintoEscherichiacoliBL21(DE3)pLysScells，respectively，andoverexpressedwithisopropyl—B—D—thiogalac— topyranoside(IPTG)．Proteinsweredenaturedwith6Murea，andpurifiedbyacolumnofHiTrapSP．Polymerizationsof PgFtsZ，ZAN01，ZAN02weredetectedbysedimentationinthepresenceof10mM ofMgC12，CaC12，andMnC12，respec— tively．Res