TRAIL真核表达质粒的构建及其在膀胱癌细胞中的表达.pdfVIP

山东，医药2008年第48卷第45期 TRAIL真核表达质粒的构建及其在膀胱癌 细胞 中的表达 林海群 ，王绍勇 ，李宝生 ，‘翟利民 (1山东省肿瘤医院，山东济南250117；2山东大学第二医院) [摘要] 目的 构建TRAIL真核表达质粒并初步研究其在膀胱癌细胞 中的表达。方法 提取Jurkat淋巴瘤 细胞总RNA，进行RT—PCR反应，产物测序证实后插入经同样酶切的质粒PcDNA3．1中，构建成真核表达质粒 PcD． NA3．1一TRAIL。Westernblot法鉴定其能否在膀胱癌细胞中表达。结果 Jurkat淋巴瘤细胞的 RT—PCR产物经测序 证实为TRAIL基因的全长序列；经酶切 、测序证实成功构建 PcDNA3．1-TRIAL质粒；Westernblot结果显示 ，转染上 述质粒的膀胱癌细胞中有TAR IL的表达。结论 成功构建了表达全长TAR IL的真核表达载体，并通过 Western blot验证其可在膀胱癌细胞中表达。 [关键词] TRAIL；质粒；膀胱肿瘤 [中图分类号] R737．14 [文献标识码] A [文章编号] 1002—266X(2008)45-0013-03 ConstructionandidentificationofeukaryoticexpressionvectorofhumanTRAILgene LIN Hai—qun ，WANG Shao一，1D， ，LIBao—sheng，ZHAILi—min (1ShandongTumorHospital，Jinan250117，P．R．China) Abstract：Objective ToconstructTAR ILgeneeukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1一TAR ILandstutyitsexspres— sioninhumanbladdercancerlion．Methods TRAILgenewasamplifiedfrom themRNA ofJurkatcellsbyRT．PCR．PCR productWas digested，andclonedintoeukaryotieexpressionvectorpcDNA3．1wasdigestedbythesameenzymes．Plasmid pcDNA3．1一TAR ILwas transferredintohumna bladdercancercellsandW estern blotdetecteditsexpression．Results cD— NA Was amplifiedbyRT—PCR nadthesequencingresultprovedthatitWas TAR ILfulllen~h．Western Blotcoulddetectex— pressionofTAR ILinbladdercna cercells．Conclusion TheeukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1TRAILhasbeencon— strnctedsuccessfullyandexpressesthecorrectproteininbladdercancercells． Keywords：TRAIL；plasmid；bladderneoplasms 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)属于 1．2 主要试剂 RT．PCR试剂盒，限制性 内切酶 Ⅱ型跨膜蛋 白质，是近年发现的TNF家族新成员。 EcoRI、饿 Ⅲ、TDNA连接酶均为大连宝生物公司 TNF具有大量、快速诱导凋亡的作用，并且仅诱导转 产品。TRIzol试剂、RPMI1640购 自Gibco公司，Li— 化细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞发生凋亡，而对正 pofectamine2000为 Invitroen公司产品，TRAIL单克 常组织无影响 J。已有研究表 明人类重组 TRAIL 隆抗体为 SantaCruz公司产品，HRP标化二抗为北 蛋 白(rTRAIL)可诱导膀胱肿瘤细胞凋亡，且与化疗 京中山生物技术公司产品。 药物有协同抗肿瘤作用 J。2003年 5月 一2004年 1．3 TRAIL基因的