Twist对小鼠乳腺癌细胞基因表达谱的调控研究.pdfVIP

中国生物工程杂志 China Biotechnology，2008，28(4)：1～6 Twist对小鼠乳腺癌细胞基因表达谱的调控研究 杨 静 顾玉超 于文功 (中国海洋大学医药学院 青岛 266003) 摘要 Twist是一个bHLH(basic Helix．1oop．Helix)类型的转录因子，近年来研究发现，Twist在乳腺 癌中的表达显著升高，并能促进乳腺癌的转移。为了探索Twist促进乳腺癌转移的分子机制，采 用RNA干扰技术在小鼠乳腺癌细胞株4T1中沉默Twist的表达，通过全基因组基因芯片技术检测 了Twist沉默前后4T1细胞基因表达谱的差异性。体内实验结果证明Twist表达被沉默后4T1细 胞的肺转移能力明显被抑制。芯片结果表明：表达差异显著的基因有167条，其中与肿瘤相关的 基因有26条，包括15条上调基因和ll条下调基因。这些基因中可能存在能被Twist调控并与肿 瘤转移相关的基因，为以后研究Twist影响乳腺癌转移的分子机制提供了帮助。 关键词 Twist乳腺癌 肿瘤转移 基因表达谱 ． 中图分类号 Q786 Twist蛋白是一个bHLH(basic Helix-loop-Helix)类 尽管目前Twist已经被确认是一种癌蛋白，但是 型的转录因子，在小鼠和人类中其氨基酸序列具有 Twist究竟是通过调节哪些基因的表达从而影响癌症发 96％的同源性，并且在不同的种属中其DNA结合区域 生发展的机制却不完全清楚。为了研究其具体机制， 具有100％的序列保守，都能结合一种E．box的DNA序 本文建立了Twist沉默细胞模型，然后利用全基因组芯 列：CANNTG．同其它转录因子一样，Twist能在转录水 片技术来检测差异基因，希望能从这些差异基因中发 平上调控许多基因的表达 “ 。Twist生物学功能的最 现被Twist调控在肿瘤转移过程中发挥作用的靶基因。 初发现是在胚胎发育过程中通过促进表皮一问叶细胞 1 材料与方法 转换(EMT)来调节胚胎的发育 。而EMT是一个失 去上皮细胞极性、细胞与细胞接触能力，并且重塑细胞 1．1 细胞与培养基 骨架的过程，在许多肿瘤的进展中起重要的作用。目 小鼠乳腺癌细胞株4T1为美国Karmanos Cancer 前研究发现Twist能影响肿瘤细胞的凋亡，对许多肿瘤 Insitute的Fred R．Miller教授提供。4T1细胞可以在肺 的侵袭和转移都有重要影响 卜m ，在乳腺癌中也发现 形成转移灶，并且有肝转移和骨转移能力。人的逆转 Twist发生异常表达并在乳腺癌的转移过程中发挥重要 录病毒包装细胞株Phoenix A细胞为本实验室保存。 的作用¨ ]。已有报道在高度转移性的小鼠乳腺癌细 细胞培养用培养基为 DME～10培养基：DMEM 胞中抑制Twist表达，可以特异性阻止癌细胞从乳腺到 (GIBCO)，含10％胎牛血清和1％非必需氨基酸。 肺部的转移和血管内渗；在人的乳腺癌细胞中也发现 1．2 仪器及试剂 Twist能通过抑制E-cadherin的表达来促进 EMT从而 7500实时荧光定量PCR系统(Applied Biosystems， 促进肿瘤的迁移和侵袭 川。 Singapore)。反转录PCR所用试剂为：高容量cDNA反 转录试剂盒(Applied Biosystems，Warrington，UK)。定 收稿日期：2007—12—11 修回日期：2008-01—10 }国家“973”计划资助项目(2003CB716402) 量 PCR所用试剂 为：SYBR．Green Master PCR mix 通讯作者，电子信箱：yuwg66@OUC．edu．cn (Ap