T—RFLP技术及其在动物胃肠道微生物群落多样性研究中的应用.pdfVIP

294 《乳业科学与技术》 2008年第6期 (总第 133期) T—RFLP技术及其在动物胃肠道微生物群落多样性研究中的应用 于 萍，王加启，卜登攀，邓露芳，刘开朗 (中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京 100193) 摘 要：随着分子生物学技术的飞速发展，越来越多的新兴研究手段应用于胃肠道微生态系统的研究之 中。介绍了末端限制性片段长度多态性技术(T—RFLP)的基本原理、操作流程和优缺点，并总结了该技术 在动物胃肠道微生态研究中的应用现状。 关键词：末端限制性片段长度多态性；微生物多样性；胃肠道微生态 中图分类号：Q93—33 文献标识码：A 文章编号：1671—5187(2008)06—0294—04 T-RFLP and itsApplication in GastrointestinalM icrobialDiversity YuPing，WangJiaqi，Bu Dengpan，DengLufang，LiuKailang (StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition，InstituteofAnimalScience， ChineseAcademyofAgricultureSciences，Beijing100193，P．R．China) Abstract：With the rapid development ofthe molecular biotechnologies，more and more emerging approachesare applied in the investigation ofmicrobialecology ofgastrointestinaltract．The present review representsa comprehensive summary ofthe terminalrestriction polymorphism (T—RFLP) technology， covering aspects including its basic principles，operational procedures，advantages and disadvantagesand itsapplicationsin animalgastrointestinalmicrobialecology． Key words：terminalrestriction fragmentlength polymorphism (T-RFLP)；microbialdiversity； gastrointestinalmicrobialecoloyg 复杂微生物群落的组成及其多样性是微生物 库 内容越来越丰 富 ，仅 RibosomalDatabase 生态学研究的基础领域之一。目前，已有多种不依 Project(RDP)数据库就包括了l6多万种细菌的 赖于培养的指纹图谱技术被用于分析微生物群落 酶切DNA指纹信息。随着环境微生态研究的需要 结构及其动态变化，其中应用最为广泛的包括变 及 自动测序仪在国内不断普及，将这种快速精确 性／温度梯度梯度凝胶电泳(DGGET／GGE)，单链 的微生物群落分析方法引入实验室是十分有必要 构象多态性 (SSCP)和末端限制性片段长度多态 的4[1。本文就T—RFLP技术的基本原理、实验流程 性(T—RFLP)等 。T—RFLP技术是限制性片段长 及其在动物胃肠道微生物群落分析中的应用做了 度多态性技术(RFLP)与DNA测序技术不断完善 阐述，并就其弊端提出了解决办法。 融合而产生的一种全新、高效、快速的微生物群落 结构分析方法。自1997年l3l首次报道以来，该技 1T—RFLP的基本原理 术在微生物群落分析中得到广泛应用，与其他指 首先 ，根据核糖体小亚基 RNA基因(16S 纹技术相比，T—RFLP具有以下优点：(1)操作简 rRNA)基因的保守区设计通用引物，其中一个引 单，高通量，能够迅速产生大量可重复、精确的数