一种同步观察喜树碱与菌根丛枝结构的方法.pdfVIP

植物生理学通讯 第44卷 第5期，2008年 10月 985 一 种同步观察喜树碱与菌根丛枝结构的方法 赵昕 ，一，谢国恩 ，宋瑞清l1，阎秀峰 ， 黑龙江省林业科学院，哈尔滨 150081；东北林业大学 生命科学学院，林学院，哈尔滨 150040 A M ethod toSynchr0n0usly ObservetheM ycorrhizalStructureand CamptothecinoftheRootsinCamptothecaacuminataDecneSeedlings ZHAOXin，，XIEGuo—En，SONGRui—Qing，YANXiu—Feng， HeilongjiangAcademyofForestry,Harbin150081，China；。CollegeofLifeSciences，CollegeofForestry，NortheastForestry University,Harbin150040,China 提要：本文介绍一种用激光共聚焦扫描显微镜同步观察喜树碱、丛栈菌根及其结构的方法。喜树丛枝菌根经甘油浸润和 明胶包埋后制成切片，再经酸性品红染色后在激光共聚焦扫描显微镜下观察。波长488nm处激发光下可获得清晰的丛枝 菌根透射图像，364nm处激发光下可获得喜树碱的荧光图像，通过两图像的叠加，在喜树丛枝菌根 中得到喜树碱的定位图 像。用此方法初步研究了喜树丛枝菌根的喜树碱分布。 关键词：喜树碱；丛枝菌根；冰冻切片；激光共聚焦扫描显微镜 喜树碱是我国特有树种喜树中含有的一种重 材料与方法 要次生代谢产物，因其具有 良好的抗肿瘤活性而受 1材料 到广泛关注(Yan等2003)。喜树碱经紫外光激发 喜树(CamptothecaacuminataDecne)幼苗参照 具有发出强蓝色荧光的特性(Li等2002)，据此人们 赵昕等(2006)的实验方法培养并接种丛枝菌根真 已经对两年生和三年生喜树幼叶和幼枝中的喜树碱 菌。喜树幼苗栽植于直径20cm、高20cm的 进行了组织细胞化学定位研究(Pasqua等2004；刘 花盆中培养，每盆 1株，盆中基质为土壤与河沙的 文哲和王 白芬2004)。 混合物(体积比3：1，过2min筛，混合后于 121℃下 丛枝菌根是 自然界中分布最为广泛的一类菌 灭菌2h)，有机质含量为2．41％、全氮含量为0．052％、 根，它是由陆生植物根和接合菌纲的真菌共生发育 全磷含量为0．025％、全钾含量为 1．03％、碱解 而成(Strack等2003)，自然界中约有90％的维管植 氮含量为56．67mg．kg～、速效磷含量为2．50 物都能形成丛枝菌根(刘润进和李晓林2000)。丛 mgk·g一、速效钾含量为 104．94mgk·g～，pH6．59。 枝菌根真菌在植物根系皮层细胞 内和细胞间形成菌 接种含有蜜色无梗囊霉(AcaulosporamelleaSpain 丝体，并且在侵入的根系皮层细胞 内菌丝连续二分 ＆Schenck)孢子的菌土，均匀层播于土表下喜树幼 叉形成树枝状或花椰菜状结构，即所谓的丛枝结 苗根部，接种剂量为30g．盆～，孢子密度为 l9个 ．g。 构。丛枝菌根负责进行菌根真菌和宿主植物之间 (干土)。接种45d后采集喜树幼苗根部进行切片 的物质交换，将矿质营养尤其是磷素和水分提供给 观察 。 植物，而植物则向真菌转运碳水化合物。许多研究 2 方法 已经观察到丛枝菌根真菌与植物次生代谢的相关