人类及部分实验动物MHC-DRB3.2基因核苷酸序列同源性分析.pdfVIP

第 25卷 第 5期 实验动物科学 Vo1．25 No．5 2008年 10月 IAB0RAT0RYANIMALSCIENCE October20o8 驴 护 研究 ·论著 、 g 、扩 、护 驴 驴 人类及部分实验动物 MHC—DRB3．2基因 核苷酸序列同源性分析 禹文海 黄 芬 和占龙 鲁绍雄。 连林生 杨亮宇 赵 远 鲁9l7{尧 杨竟凯 (1．中国医学科学 院／中国协和医科大学医学生物学研究所 ，昆明 6501l8) (2．上海交通大学农业与生物技术学院，上海 201240) (3．云南农业大学动物科学技术学院，昆明 650201) 摘要：目的 研究人类及部分实验动物 DRB3．2基因核苷酸序列的同源性。方法 利用PCR技术扩增得到牛的 DRB3．2基 因片段 ，并测定其核苷酸序列；从 GenBank中下载人类、猕猴、绵羊、山羊、猪 的相应基 因片段 ；利用 DNAMAN软件进行碱基组成分析、同源性分析和构建分子进化树。结果 所分析的物种该基因片段大小为 267bp， 没有发现碱基的缺失 以及插人现象；A、T、G、C四种碱基 以及 G+C的含量在不同物种之间相差较小 。就某种动物 来说，G的含量最高，T的含量最低 ，G+c的含量要明显高于A+T含量；人类与猕猴、绵羊、山羊、牛、猪的同源性分 别为91．8％、82．8％、82．4％、81．3％、81．6％。结论 不同物种 MHC．DRB3．2基因核苷酸序列的同源性都 比较高；在 研究人类有些疾病时，猕猴是其它实验动物不可替代的；DRB3．2基因是研究生物进化和系统发育分析的一个理想 遗传标记 。 关键词：MHC；DRB3．2基因；核苷酸序列；同源性分析 中图分类号 ：Q523 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—6179(2008)05—0024．04 20世纪40年代英国的GeorgeSnell博士在研究 小鼠近交系间肿瘤的移植时，发现成功的移植受一 1 材料和方法 个主要组织相容性复合体 (Majorhistocompatibility complex，MHC)控制 ，为人类的器官移植奠定 了基础 ， 1．1 实验动物 为此 ，GeorgeSnell博 士获得 了 1980年 的诺 贝尔 牛血样采 自云南省高峰黄牛 良种繁育基地。前 奖…。主要组织相容性复合体基因又称白细胞抗原 腔静脉采血6mL，ACD抗凝 ，血液 ：ACD=6：1，4~C运 (Leucocyteantigen)基因，是 由动物体 内紧密连锁、高 输，一20℃保存。 度多态的基 因座位所组成 的一个基因家族。DRB3 1．2 基因组 DNA 的提取 基因是 MHC基因家族中最主要的功能基因，其编码 参照文献 [6]，采用常规的酚 一氯仿抽提法从冻 的MHC抗原与同种移植排斥反应控制 、免疫应答与 存血样 中提取基因组 DNA，TE溶解 ，一20℃保存。 调控等方面起着重要作用 ，与动物的抗病性和易感 1．3 PCR扩增及测序 性密切相关 “J。其第 2外显子 (DRB3．2)是编码抗 本研究采用半巢式 PCR扩增来获得所需的 目 标片断，引物设计参照文献 ，引物由上海生工生物 原的主要功能区(抗原结合区) 。本研究测定了牛 工程有 限公司合成。第一轮扩增 ，上游 引物 ：5’一 DRB3．2基因的核苷酸序列 ，并与人类及部分实验动 ATccTcTcTcTGcAGcAcATTTcc．3’，下游 弓I物：5’． 物的该基 因进行 了比较分析 ，为今后开展人类及实