一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化-燕山大学学报.PDF

卷 期 燕山大学学报 年 月 文章编号：1007-791X (2013) 01-0088-07 一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化 崔洪霞 ，李春林 ，钱 龙 ，孙 滢 ，周艳艳 ，史云柯 （ 燕山大学 环境与化学工程学院，河北 秦皇岛 ； 河北省应用化学重点实验室，河北 秦皇岛 ； 燕山大学 里仁学院，河北 秦皇岛 ） 摘 要：为了获得碱性蛋白酶高产菌株，从采集的海泥中筛选得到 株具有一定产碱性蛋白酶能力的菌株，经 过复筛得到 株产酶能力较高的菌株，其中菌株 产碱性蛋白酶能力强、 耐受范围广。考察了培养基初 始 值、培养温度、培养时间、装液量、接种量等单因素对菌株 产酶能力的影响，然后进行正交试验分 析，得出该菌的较佳发酵条件为 值 、发酵时间 、 培养液 三角瓶和接种量 。影响产 酶的强弱顺序为： 值、培养时间、接种量、装液量，菌株 在较佳发酵条件下的发酵液的最大酶活力达 。本研究表明从秦皇岛海域可以获得碱性蛋白酶高产菌株，丰富了菌种资源。 关键词：碱性蛋白酶；筛选；海泥；菌株 中图分类号：Q939 文献标识码：A DOI ：10.3969/j .issn.1007-791X .2013.01.015 引言 白酶仍供不应求。国内大规模工业用碱性蛋白酶主 要依赖于进口，从自然界中筛选高产碱性蛋白酶仍 近年来，碱性蛋白酶由于与传统的化学催化剂 然任重道远。海洋以其独特和多样的生态自然环 相比具有催化能力强、底物专一性高等优点，已被 境，形成了丰富的海洋微生物资源，并产生了种类 广泛应用于制革、银回收、医药、食品、饲料、化 繁多功能优良的生物活性物质。国内对产碱性蛋白 学工业、废物处理等生产及行业 。其最早发现于 酶海洋微生物的研究，主要集中在青岛海域、南海 猪胰脏中，而 年又发现于地衣芽孢杆菌中 ， 海域、红树林海域等地区，渤海海域特别是秦皇岛 开辟了微生物碱性蛋白酶的来源。在碱性蛋白酶的 海域研究较少，筛选到高产碱性蛋白酶产生菌的可 应用过程中，发现存在一些弊端，如对表面活性 能性较大。 剂、氧化剂、热、酸、碱等稳定性差和培养基成本 本文以从秦皇岛海域鸽子窝公园采集到的泥 较高等。因此，寻找能产生具有良好酶学特性并能 样为实验对象，通过菌株的初筛、复筛，筛选出了 大规模生产的碱性蛋白酶高产菌株，具有重要的理 一株具有较好产酶能力的菌株，通过发酵条件考察 论应用价值 。 等实验对该菌的产酶特性有了初步了解，为后续实 世界各国的微生物工作者在碱性蛋白酶产生 验奠定基础。 菌筛选等方面已经做了大量工作，邱秀宝 、 等人 在碱性蛋白酶产生菌株的筛选、发酵 材料 条件等方面有大量卓有成效的研究。而且有学者对 实验材料为 份泥样。分离纯化用培养基：蛋 来自盐碱湖、温泉、极地、海洋等极端环境 下 白胨 ，牛肉膏 ，磷酸铁 ，琼脂 的碱性蛋白酶菌株进行了研究，经过分离纯化得到