一株高产纳豆激酶菌株的鉴定与分析-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 1 :187-194 一株高产纳豆激酶菌株的鉴定与分析 王雪妍  孙玉飞  冯菲  陈晓飞  李锋  周伏忠 （河南省科学院生物研究所有限责任公司 河南省微生物工程重点实验室，郑州 450008） 摘 要 ： 鉴定高产纳豆激酶菌株Td，分析纳豆激酶的分子特征。利用菌体形态、生理生化特征、以及分子生物学方法对菌 株Td 进行鉴定 ；并采用MALDI-TOF 质谱测定与分析、SDS和纤溶活性测定等方法检测纳豆激酶特性，利用PCR 方法扩增 纳豆激酶的基因全长。结合菌体形态、生理生化特征和16S rDNA、gyrA 基因序列、DNA-DNA 杂交率等实验结果，鉴定菌株Td 为 枯草芽孢杆菌枯草亚种 （ subsp. ）；菌株Td 发酵产生的纳豆激酶产量可达300 mg/L 以上，占发酵液总蛋白的 Bacillus subtilis subtilis 40% 以上；纤溶活性达230 U/mL 以上；氨基酸序列与subtilisin E 的序列相似性最高；基因全长序列为 1 143 bp。枯草芽孢杆菌枯 草亚种Td 是一株高产、高活性纳豆激酶的产生菌，具有优良的工业化开发价值。 关键词 ： 枯草芽孢杆菌枯草亚种 ；纳豆激酶 ；菌株鉴定 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.01.030 - Identification and Analysis of a Nattokinase producing Strain - - - - WANG Xue yan SUN Yu fei FENG Fei CHEN Xiao fei LI Feng ZHOU Fu zhong （Institute of Biology Co. ，Ltd. ，Henan Academy of Sciences ，Key Laboratory of Microbial Engineering of Henan Province ，Zhengzhou 450008 ） Abstract: The objective of this work is to identify an isolate Td of yielding high nattokinase, and to analyze the molecular characteristics of its nattokinase. The morphologic, biochemical and physiological characterizations, and molecular biological methods were used to identify the taxonomic position of isolate Td ；mass spectrometric determination and analysis of MALDI-TOF, SDSand fibrinolytic activity were employed to measure the characteristics of nattokinase, and PCR met