从原始生殖细胞分离克隆鸡胚胎生殖细胞的研究.PDF

第24 卷第9 期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2004 年9 月 * 1** 2 3 王 娟 杨娜娜 杜立新 ( 1 滨州医学院 滨州 256603 2 山东农业大学动物科技学院 泰安 271018 3 中国农业科学院畜牧所 北京 100094) 从孵化515 天的鸡胚生殖腺中分离得到大量原始生殖细胞(PGCs) 集落, 这些集落的细胞 经多次克隆传 具有胚胎生殖细胞(EG) 的诸多特征, 如有连续传 的能力(传至第9 ) , 细胞集 落有典型鸟巢状结构, PAS 染色阳性, AKP 染色阳性, 在无饲养层无分化抑制因子LIF 时可以自 发分化成几种细胞类型, 包括成纤维细胞、神经细胞、自律细胞等, 悬浮培养时具有形成类胚体的 能力。上述发现表明该细胞具EG 细胞的诸多特性, 为类EG 细胞。 鸡 生殖腺 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 具有多向分化潜能的胚胎干细胞有两种来源: 化和成熟的调节机制以及生殖系肿瘤的产生提供 一是来 自于早期胚胎内细胞团的胚胎干细胞 了丰富的材料; 此外, 也为发育多能性干细胞增添 (embryonic stem cells, ES) , 另一种是来自于胚胎生 了不同来源的新成员。本研究的目的是在实验室 殖腺原始生殖细胞(primordial erm cells, PGCs) 的 [8, 9] 原有工作的基础上 , 以鸡胚生殖腺为材料, 探讨 胚胎生殖细胞( embryonic erm cells, EG) 。原始生 影响鸡PGCs 分离克隆的相关因素, 完善鸡EG 细 殖细胞(PGCs) 是指能发育为精子或卵子的祖先细 胞的分离克隆程序, 并最终获得鸡EG 细胞系。继 胞。目前, 从PGCs 中培养EG 细胞, 在小鼠、大鼠、 而通过对鸡EG 细胞系的定向改造与选择实现鸡 猪、人、牛和鸡等动物上已取得重要的进展。 的基因组特定的遗传修饰, 提高鸡的生产和抗病性 自从Waldeyer( 1870) 首先在鸡胚的生殖腺中发 能, 并为开发输卵管生物反应器提供高效的技术手 现PGCs 以来, 人们对鸡PGCs 的体外培养和扩增进 段。 [ 1~ 3] 行了大量的研究 。Chan 等( 1995) 将分离到的 鸡PGCs 在体外培养5天后再注入正常孵化60h 的 1 鸡胚血管中, 发现注入的PGCs 可进入到受体胚胎 111 [4] 生殖腺中, 并发生了数量增殖 。随后Chan 等 11111 实验动物 ( 1) 寿光黑鸡:聊城市嘉明种鸡 ( 1997) 用培养 5 天的PGCs 成功地得到了嵌合体 场惠赠(4 只) , 毛色基因型为CCOOEE, E 为色素扩 [5] 鸡 。Park (2000) 从515 天的鸡胚生殖腺中分离 散基因, 黑色对显性白羽为隐性, C 为色素基因, O PGCs 并将其在体外培养4 个月, 然后分别用传至3 为氧化酶基因。(