克氏原螯虾卵黄蛋白原受体cDNA 部分序列的克隆及 - 渔业科学进展.PDF

第35 卷 第 6 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.35, No.6 2 0 1 4 年 1 2 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Dec., 2014 DOI: 10.11758/yykxjz / 克氏原螯虾卵黄蛋白原受体cDNA 部分序列的 克隆及mRNA 表达量的相对定量* 刘 红 崔 俊 颜 婕 蔡生力① (上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306) 摘要 从成熟的克氏原螯虾卵巢中提取总RNA ，通过同源克隆得到了卵黄蛋白原受体cDNA 部 分序列，长度为506 bp ，在NCBI 网站上进行比对后发现，其与斑节对虾、短沟对虾、罗氏沼虾的 卵黄蛋白原受体(VgR) cDNA 序列有较高的相似性。采用实时荧光定量PCR 方法，测定了卵巢不同 发育时期卵巢和肝胰腺两个组织中卵黄蛋白原受体 mRNA 的相对表达水平。结果显示，卵巢是卵 黄蛋白原受体基因表达的主要部位，而肝胰腺只能检测到少量表达，卵黄蛋白原受体基因在卵巢的 卵原细胞增殖期相对表达量最高，随后下降，成熟期达到最低值，恢复期开始回升。结合卵巢不同 发育阶段卵巢质量的变化计算表达总量，结果发现，卵黄蛋白原受体基因的表达总量在卵原细胞增 殖期为最低，随后持续升高并至成熟期达到峰值，恢复期急剧下降,但仍略高于卵原细胞增殖期的 表达量。此外，运用所构建的系统进化树比较了克氏原螯虾VgR mRNA 与其他物种间的遗传距离。 关键词 卵黄蛋白原受体；克氏原螯虾；克隆；表达量 中图分类号 S917 文献标识码 A 文章编号 1000-7075(2014)06-0083-07 在卵生动物中，雌性成熟的标志是卵黄蛋白的合 表达量的研究很少。克氏原螯虾(Procambarus clarkia) 成。卵黄蛋白是一种为胚胎提供营养物质的糖脂蛋 分布在世界各地，进入中国后，已经成为重要的甲壳 白，由卵黄蛋白原修饰而来(吴维福等, 2012) 。在虾 经济物种，只是迄今为止，克氏原螯虾的卵黄蛋白原 类中，卵巢的外源卵黄蛋白原由肝胰腺合成，通过血 受体序列及表达量的研究还未见报道。本研究以克氏 淋巴循环系统运输到卵巢，被卵母细胞通过卵黄蛋白 原螯虾为研究对象，克隆了卵黄蛋白原受体 mRNA 原受体介导的胞饮作用摄取，在细胞内被酶解修饰成 的部分序列，并采用实时荧光定量RT-PCR 相对定量 小分子量的卵黄相关蛋白并发挥其营养作用(Schneider, 法(Livak et al, 2001)对不同卵巢发育时期雌虾的卵巢 1996; Willnow, 1997; Sappington et al, 1998)。卵黄蛋 和肝胰腺卵黄蛋白原受体mRNA 表达水平进行分析， 白原受体(Vitellogenin receptor, VgR)是低脂蛋白受体 从分子水平上探讨克氏原螯虾卵巢发育机理。 超家族中的一员，在卵巢发育过程中与卵黄蛋白原结 合，起到受体介导的作用，因此卵黄蛋白原受体在胚 1 材料与方法 胎成熟的过程中有重要的作用。 1.1 实验材料 目前，已经公布了不少十足目虾、蟹类的卵黄蛋 白原cDNA 全序列，针对甲壳动物卵黄蛋白原的合成 实验用克氏原螯虾雌虾，平均体重为(10.90± 部位的研究也较多(Tom et al, 1987; Yang et al, 2000)。 4.55) g ，平均体长为(6.83±0.73) cm ，分别于2012 年 但是关于卵黄蛋白原受体的 cDNA 全序列和 mRNA 5−8 月购自上海市浦东新区临港新城古棕路菜市场， * 上海市教委创新项目(12YZ125)和上