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分子生物学实验技术 Current Protocols for Molecular Biology 本文由【中文word文档库】 搜集整理。中文word文档库免费提供海量教学资料、行业资料、范文模板、应用文书、考试学习和社会经济等word文档 课程编号：???????????? 开课单位：生化与分子生物学研究所 总学时：48??????? 学分：2 一.??? 目的和任务 分子生物学已成为当今生命科学研究的主流，分子生物学理论和 技术已深入到生命科学的各个领域，特别是生物医学领域，与人类疾病的发生诊断和治疗各个环节密切相关。本实验技术目的是跟踪国内外分子生物学前沿内容，系统介绍分子生物学常用技术及新进展，如基因克隆及原核和真核细胞表达，分子杂交Southern、Northern、Western，二维电泳，RT-PCR等。注重培养本科生利用分子生物学技术独立设计和完成各自研究领域内问题的能力，为其从事基础和临床医学研究打下坚实的理论和实验基础。 二.??? 授课内容： 理论内容: 1.???? 现代分子生物学发展概论 2.???? PCR技术的发展及其应用 3.???? 基因克隆技术的发展及其应用 4.???? 基因表达的调控以及在基因克隆中的应用 5.???? 核酸杂交技术和分子印迹 6.???? 蛋白质组学概论及蛋白质二维电泳技术和生物质谱技术 7.???? 色谱技术以及在分子生物学中的应用 8.???? 基因的定点诱变以及分子的体外定向进化 实验课内容: 9.???? 实验一：目的基因的PCR扩增纯化（PCR技术进展及应用） 10. 实验二：目的基因与载体DNA的酶切，纯化与连接（基因克隆技术研究进展及应用） 11. 实验三：重组质粒的转化 12. 实验四：重组子的筛选鉴定 13. 实验五：基因表达 14. 实验六: Western blot 15. 实验七：蛋白质分离鉴定（二维电泳） 16. 实验八：分子杂交(southern blot） 17. 实验九：真核细胞RNA提取及RT-PCR 18. 实验十：实验设计 三.??? 成绩考评办法： 开卷考试，实验操作 教材及主要参考书： 教材： ①???? 现代分子生物学实验技术，分子生物学室编 ②???? 蛋白质工程原理，山东大学出版社 参考书： ①Short Protocols for Molecular Biology(美)L.Willy主编，1995②Molecular Cloning:a laboratory manual second edition,J.Sambrook主编，1989 生物化学与分子生物学实验教学大纲 实验学时：56 实验学分：1.5 实验周学时：8 适用专业：临床医学，药学，口腔，公共卫生，护理 ? 一、实验教学目标与基本要求 掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构、功能。掌握各种生物物质能量的正常代谢过程，机体物质代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。通过实验掌握基本的生物化学实验技术及验证部分生物化学理论课堂知识。 在实验教学中，要求学生掌握电泳、层析、分光光度、离心、分子生物学等基本的生物化学与分子生物学技术。掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。掌握DNA提取、转染、PCR、核酸杂交等重组DNA生物学技术和方法。 ? 二、实验课程内容和学时分配（总学时：56学时） 序号 授课内容 学时 实验一 理论 分光光度技术的基本原理，仪器结构及常见分光光度计 8 实验内容 蛋白质定量测定 （1）考马斯亮兰法测定蛋白质含量 （2）双缩脲法测定蛋白质含量 （3）紫外分光光度法测定蛋白质含量 实验二 理论 层析技术的基本原理，分类及应用 常用层析技术：凝胶过滤层析技术和离子交换层析技术的基本原理，层析介质种类及特性，影响因素等 8 实验内容 血清γ-球蛋白的分离，纯化和鉴定：学习盐析法粗提蛋白、用SephadexG25脱盐法和用离子交换剂进行蛋白质的纯化以及利用醋酸纤维素薄膜电泳法进行蛋白质的鉴定。 实验三76 理论 电泳技术的基本原理，影响因素，分类及应用 常用电泳技术：琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳基本原理 8 实验内容 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 物质代谢实验： （1）??? 胰岛素对血糖含量的影响 （2）??? 邻甲苯胺法测血糖含量 （3）??? 糖酵解中间产物的鉴定 （4）??? 肝脏和肌肉组织谷丙转氨酶活性测定 实验四 理论 离心技术的基本原理，常用离心机使用方法及操作注意事项 8 实验内容 核酸的分离提取和含量测定 实验五 理论 重组DNA技术的基本原理：分、切、接、转、筛 8 实验内容 质粒DNA的小量提取纯化：细菌培