分子生物学第五章分子杂交技术-广州中医药大学精品课程.PPT

分子杂交及生物芯片技术 申川军 广州中医药大学生物化学教研室 参考书 目 录 第一章 生物大分子制备和分析常用技术 第二章 蛋白质、核酸的提取与分离 第三章 PCR技术 第四章 分子杂交与印迹技术 第五章 分子克隆技术 第六章 外源基因转移技术 第七章 蛋白质表达技术 第八章 分子标技术 第九章 分子改造技术 第十章 测序及人工合成技术 第十一章 基因组学技术 第十二章 蛋白质组学技术 第十三章 生物芯片技术 第十四章 生物信息学技术  参考书 目录 第一章　核酸的分子结构与分子杂交的基本原理 第二章　核酸分子杂交的类型 　第一节　固相核酸分子杂交类型 　　一、菌落原位杂交（colonyinsituhybridization） 　　二、斑点杂交（dotblot） 　　三、southern印迹杂交（southernblot） 　　四、northern印迹杂交（northernblot） 　　五、组织原位杂交（tissueinsituhybridization） 第三章　核酸探针的种类、标记及检测 　第一节　核酸探针的种类 　　dna探针 cdna探针 rna探针 寡核苷酸探针 　第二节　核酸探针的标记和检测 　　放射性同位素　　非放射性核酸探针 第四章　核酸分子杂交实验因素的优化 　探针选择 标记方法 浓度 杂交率 杂交最适温度 　杂交的严格性 反应时间 杂交促进剂 第五章　斑点杂交 第六章　southern印迹杂交 　第一节　southern印迹杂交的基本原理 　　一、dna从凝胶到膜上的转移方法 　　二、southern杂交膜 　　三、核酸探针的标记 　第二节　southern印迹法的基本过程 　　一、dna样品的酶切和电泳 　　二、准备用于转移的凝胶 　　三、dna从琼脂糖凝胶转移到固相支持物 　　四、探针标记 　　五、杂交 　　六、洗膜 　　七、杂交结果的检测 　　八、杂交膜的重复使用 　　九、注意事项 　　十、杂交严谨性 第七章　northern印迹杂交 第八章　原位杂交 第九章　菌落原位杂交 第十章　dna芯片技术 基本概念 变性/复性： 分子杂交：异源互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子的过程称为分子杂交。 分子杂交技术：凝胶电泳分离待测DNA、RNA、Pr并转移固定到支持物或结合物上，然后与探针/抗体杂交分析。 探针(Probe)：已知序列的标记单链核酸片断，用于检测与其互补的待测核酸。 基本概念 原位杂交（In situ hybridization, ISH）： 菌落原位杂交 (Colony ISH) 组织原位杂交(Tissue ISH)： 胚胎原位杂交(Embryo ISH) ： 斑点/狭缝杂交(Dot/slot blot) ： 基本概念 Bio-chip（生物芯片） DNA chip / microarray Gene chip / microarray Oligonucleotide microarray cDNA chip Protein chip microRNA chip Lab-on-chip（芯片实验室） 分子杂交技术 生物大分子的印迹杂交技术 分子杂交技术 定义：凝胶电泳分离待测DNA、RNA、Pr并转移固定到结合物上，然后与探针/抗体杂交分析 原理：核酸变复性（序列互补）/抗原-抗体 基本工艺： 凝胶电泳（原位处理） 样品转移及固定 杂交分析（免疫结合分析） 分子杂交技术 1969 ，In situ hybridization（ISH） 1975，Southern，Southern blot: DNA 1977，Alwine，Northern blot：RNA 1979，Towbin，Western blot：Pr 1982，Reinher，Eastern blot：Pr(IEF) 分子杂交技术探针 探针基本条件（特点） 标记物（32p, 35S, 125I, Digoxigenin, FITC） 单链核酸（ssDNA，sscDNA(更常用)） 高特异性（~500bp） 标记物稳定灵敏，检测方便安全 分子杂交技术探针 探针的种类 DNA probe（基因copy数、病原基因诊断） cDNA probe（基因表达等最常用） RNA probe（ISH） Oligonuleotide-probe （25~50bp；基因诊断，SNP分析、测序、点突变检测） 分子杂交技术探针 探针标记物 放射性标记物（ [α-*N]-dNTP ） 32p(