寡肽阳离子脂质体作为基因载体的体外研究-《中国药科大学学报》！.PDF

学 报 ３２８ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１３，４４（４）：３２８－３３３ 寡肽阳离子脂质体作为基因载体的体外研究 崔　烨，王　璐，孙　琼，张　灿 （中国药科大学新药研究中心，南京２１０００９） 摘　要　采用阳离子寡肽脂质材料赖氨酰化谷氨酸双十四醇酯（ＴＧＬ）制备阳离子脂质体（ＣＬ），与增强型绿色荧光蛋 ２ 白质粒（ｐＥＧＦＰ）静电结合形成复合物（ＣＬ／ｐＤＮＡ），ＣＬ／ｐＤＮＡ粒径和表面电位分别为（１３２３±１０）ｎｍ和 ＋（３１３５± ２９９）ｍＶ。考察ＣＬ／ｐＤＮＡ对肝素及脱氧核糖核酸酶 （ＤＮａｓｅＩ）的稳定性，结果表明，ＣＬ／ｐＤＮＡ可被适宜浓度的肝素竞 Ⅰ 争性解组装释放ｐＤＮＡ，其对ＤＮａｓｅＩ的稳定性明显优于市售制剂Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００。研究ＣＬ与ｐＤＮＡ的比例（Ｎ／Ｐ）及质 粒用量对转染效率的影响，结果显示当Ｎ／Ｐ为３，质粒用量４ ｇ时，ＣＬ／ｐＤＮＡ的转染效率最佳。采用ＣＬ／ｐＤＮＡ对３种不 μ 同的细胞进行转染，发现 ＣＬ／ｐＤＮＡ在人源非小细胞肺癌Ａ５４９细胞中转染效果最好，与Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００相比，转染效率 相当但细胞毒性更低，因此为进一步研究其体内行为提供了良好的基础。 关键词　寡肽；阳离子脂质体；质粒；体外稳定性；转染效率；细胞毒性 中图分类号　Ｒ９４４　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１３）０４－０３２８－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ Ｉｎｖｉｔｒｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｃａｔｉｏｎｉｃｌｉｐｏｓｏｍｅｓｐｒｅｐａｒｅｄｗｉｔｈｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｂａｓｅｄ ｌｉｐｉｄｓｆｏｒｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｄｅｌｉｖｅｒｙ  ＣＵＩＹｅ牞ＷＡＮＧＬｕ牞ＳＵＮＱｉｏｎｇ牞ＺＨＡＮＧＣａｎ ＣｅｎｔｅｒｏｆＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｃａｔｉｏｎｉｃｌｉｐｏｓｏｍｅｓ牗ＣＬ牘ｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｕｓｉｎｇｄｉｔｅｔｒａｄｅｃｙｌＮｌｙｓｙｌＬｇｌｕｔａｍａｔｅ牗ＴＧＬ牘ａｓｃａｔｉｏｎｉｃｌｉｐｉｄ ２ ａｎｄｓｏｙｂｅａｎｌｅｃｔｉｔｈｉｎａｓｈｅｌｐｅｒｌｉｐｉｄＬｉｐｏｐｌｅｘｅｓ牗ＣＬ／ｐＤＮＡ牘ｗｅｒｅｆｏｒｍｅｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＣＬａｎｄｐｌａｓｍｉｄＥＧＦＰｄｕｅ ｔｏｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＴｈｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆＣＬ／ｐＤＮＡｗａｓａｓｓａｙｅｄｔｏｂｅ牗１３２３±１０牘ｎｍｗｈｉｌｅＺｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｗａｓ＋牗３１３５±２９９牘ｍＶＢｏｔｈＣＬａｎｄＣＬ／ｐＤＮＡｗｅｒｅｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓｉｎｔｅｒｍｓｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙＴｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆ ｐＤＮＡｆｒｏｍＣＬ／ｐＤＮＡｏｃｃｕｒｅｄｗｈｅｎｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｒｉｎＷｈｅｎｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈＤＮａｓｅＩ牞ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｃｈａｎｇｅｔｏＣＬ／ｐＤＮＡｂｕｔｔｈｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｐＤＮＡ牞ｅｉｔｈｅｒｎａｋｅｄｏｒｂｏｕｎｄ ｗｉｔｈＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００ＣＬ／ｐＤＮＡｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｐｏｓｓｅｓｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ牗ＴＥ牘ａｔＮ／Ｐｒａｔｉｏｏｆ ３ａｎｄｐＤＮＡｗｅｉｇｈ