导致田间烟草曲叶病的又一病毒(非中国烟草曲叶病毒).PDF

第45 卷 第7 期 2000 年4 月 简 报 导致田间烟草曲叶病的又一病毒 (非中国烟草曲叶病毒) 宫倩红 刘玉乐 * 洪益国 王环宇 陈 刚 蔡健和 ( 中国科学院微生物研究所, 北京100080; 广西农业科学院植物保护研究所, 南宁530007. *联系人, Email: Liuyl@sun.im.ac.cn) 摘要 对病毒分离物DNA 序列分析的结果表明, 除曾报道的中国烟草曲叶病毒(TbLCV-CHI), 还 存在另一种能引起我国广西地区烟草曲叶病的双生病毒. 该病毒DNA-A 由2 734 个核苷酸组成, 与 TbLCV-CHI 的已知的部分序列不同. 其大基因间隔区(LIR)长 269 nt, 病毒链有两个ORF : AV1(115 aa)和AV2(外壳蛋白基因, 256 aa); 病毒互补链有4 个ORF: AC1( 复制酶基因, 361 aa) AC2(反式激活蛋白, 134 aa) AC3(134 aa)和AC4(97 aa). 其所处的地理位置 生物特性及序列分 析均表明该病毒属于旧世界的亚组 双生病毒, 由它的序列推测可能是中国番茄黄化曲叶病毒 (TYLCV-CHI) 的一个株系. 关键词 烟草曲叶病 双生病毒 DNA 序列 中国烟草曲叶病毒 中国番茄黄化曲叶病毒 烟草曲叶病是热带和亚热带产烟区的普通病害. 我国云南 广西 广东 福建 台湾 吉林及黑龙江等省烟区发病较为普遍, 近年有扩展蔓延的趋势. 发病时期的早晚决定烟叶产 [1] 值损失的大小, 在烟草早期发病, 基本绝产, 在其旺长期感染, 损失达 50%左右 . 1982 年初 [2] 步确定我国烟草曲叶病为双生病毒 TbLCV-CHI 引起, 1994 年从分子水平确证了这一点 . 中 国的几种双生病毒仅有 DNA-A 的部分序列的报道, 近年来病毒间重组的发现使得不能单独 依据 DNA-A 的部分序列进行鉴定分类. 我们在试图进一步克隆引起烟草曲叶病的病毒全长 DNA-A 时发现存在另外一种双生病毒, 能够引起我国广西地区烟草曲叶病, 它的基因组序列 与 TbLCV-CHI 已知部分序列不同, 显然不是 TbLCV-CHI, 与中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCV- CHI)[3] 已知的部分序列非常接近. 本文报道了该病毒的 DNA-A 的全序列及其与其他双生病 毒比较的结果. 1 材料与方法 ( ) 病毒繁殖. 以广西南宁地区的烟草曲叶病烟草植株为材料, 采集温室中经烟粉虱接 种的烟草病叶, 20 保存备用. ( ) 植物总DNA 的制备. 按文献[4]的方法进行. ( ) 全长病毒DNA-A 的PCR 及克隆. 人工合成引物1: 5 CTAATCCTGTATATGCGACG 3 , 引物2: 5 AGGCATGAGTACACGCCATGTAC 用于PCR. 50 L 反应液中含 1 L 上述制备 的DNA, 75 pmol 引物1 和引物2, 0.2 mmol/L 4 dNTPs, 1.5 mmol/L MgCl , 50 mmol/L KCl, 1