条斑星鲽连续性鳍细胞系的建立与鉴定-山东大学学报（理学版）.PDF

　第４５卷　第５期 山　东　大　学　学　报　（理　学　版） ２０１０年５月　 　 　 　 　 　 　Ｖｏｌ．４５　 Ｎｏ．５　 　 　 　 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｍａｙ２０１０　 　文章编号：１６７１９３５２（２０１０）０５００２２０６ 条斑星鲽连续性鳍细胞系的建立与鉴定 樊廷俊，徐晓辉，姜国建，郭雪阳，孙爱，徐彬 （中国海洋大学海洋生命学院海洋生物系，山东 青岛２６６００３） 摘要：为了建立条斑星鲽鳍细胞系，为其细胞工程及病毒学研究奠定基础，对经 型胶原酶和透明质酸酶联合消 Ⅱ 化法所得鳍组织碎块分别用ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｌ１５和Ｍ１９９培养液（ｐＨ７．２）在１８～２６℃进行了鳍组织的体外培养，并 在所筛选出的最适培养液和培养温度下通过添加羧甲基壳寡糖、碱性成纤维样生长因子（ｂＦＧＦ）和Ｉ型胰岛素样 生长因子（ＩＧＦＩ）启动了鳍细胞的原代培养。体外培养结果显示，条斑星鲽鳍细胞的最适培养液为ＤＭＥＭ／Ｆ１２ 培养液，最适培养温度为２２℃，原代培养鳍细胞的生长分裂状态旺盛，细胞形态主要为成纤维样，２０ｄ后便可形成 汇合细胞单层，经过连续的继代培养已建立了条斑星鲽的连续性鳍细胞系，目前已传至第１３５代；生长特性检测结 果显示，第６０代鳍细胞系细胞的群体倍增时间为５６．９ｈ，其生长分裂状态依然十分旺盛；染色体分析结果显示，第 ６０代鳍细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性，但其特征性染色体数目仍为４６条，并具有２ｓｍ＋４４ｔ的正常二 倍体核型，证明所建立的细胞系确为条斑星鲽连续性鳍细胞系。该细胞系为条斑星鲽的细胞工程育种和病毒 － 细胞相互作用提供了一个理想的体外研究体系，具有重要的理论意义和应用价值。 关键词：条斑星鲽；鳍细胞；原代培养；继代培养；细胞系 ＋ 中图分类号：Ｑ８１３．１１　　　文献标志码：Ａ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｆｉｎｃｅｌｌｌｉｎｅ ｆｒｏｍｂａｒｆｉｎｆｌｏｕｎｄｅｒＶｅｒａｓｐｅｒｍｏｓｅｒ ＦＡＮＴｉｎｇｊｕｎ，ＸＵＸｉａｏｈｕｉ，ＪＩＡＮＧＧｕｏｊｉａｎ，ＧＵＯＸｕｅｙａｎｇ，ＳＵＮＡｉ，ＸＵＢｉｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭａｒｉｎｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎａ， Ｑｉｎｇｄａｏ２６６００３，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｂａｒｆｉｎｆｌｏｕｎｄｅｒｆｉｎｃｅｌｌｌｉｎｅａｎｄｌａｙａｓｏｌｉｄｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｖｉｒａｌａｎｄｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓ， ｔｈｅｆｉｎｔｉｓｓｕｅｓ，ｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅＩＩ，ｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎ２０％ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）ｃｏｎｔａｉ ｎｉｎｇＤＭＥＭ／Ｆ１２（１∶１），Ｍ１９９ａｎｄＬｅｉｂｏｖｉｔｚＬ１５ｍｅｄｉｕｍ（ｐＨ７．２），ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ２０％ ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ， ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｈｉｔｏｓａｎ，ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ｂＦＧＦ）ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＩ（ＩＧＦＩ），ａｔ１８～２６℃， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｎｖ