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一、组织的固定 2、常规固定液为10%中性福尔马林(4%中性甲醛)。应预先多量配制贮存,以备随时使用。小标本的固定时间为4一6h,大标本为18一24h或更久。 3、根据病理学特殊检查(特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色,电镜观察等)的需要,应选用其它适宜的固定液进行固定。 4、器官、组织固定的基本方法 (1)食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官:依规范方法剪开后,按其自然状态平铺于硬纸板上(重点暴露黏膜面或内表面的病变处),并用大头针将标本边缘处固定于纸板上,然后放入10%福尔马林中固定(黏膜面或内表面朝向容器的液面,并覆盖薄层脱指棉)。 (2)肝、脾:由器官背面,沿其长轴每间隔1.5一2.0cm纵向平行剖开,切成数片。将每片肝或脾轻轻地平放于装有10%福尔马林的容器中,容底面衬以脱脂棉。应避免标本弯曲和相互间的叠压。 (3)肺叶:放入固定液中的肺叶漂浮于液面,须在肺表面覆盖浸合固定液的薄层脱脂棉。必要时从支气管注入适量的10%福尔马林。 (4)肾:沿肾外缘中线朝肾门方向做一水平切面(深达于肾盏) 再行固定。 (5)淋巴结:先用10%福尔马林固定1h后,再沿其长轴切开(肿大的淋巴结可切成数片,厚2一3mm)继续固定。 (6)骨组织:先锯成小片(若是长骨应做横向锯片),在10%福尔马林中固定24h后,再进行脱钙。 (7)微小组织或液体沉淀物:先用试纸或滤纸妥为包裹(须用大头针扎牢),然后放入专用小盒内进行固定,以防检材遗失。 凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的患者姓名、性别及病理检验号(病理号)。 5、多数固定液对人体有害,需要防护,必须在封闭的通风条件下进行操作。 (3)固定组织液的固定液量,一般应为组织块总体积的5一10倍以上。 (4)室内常温(25℃左右)下的固定时间为3一24h;低温(4℃)下的固定时间应延长。 (5)固定组织块的容器要大些。 (6)组织块固定期间需要间断地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。 7、常用固定液 (1)4%中性甲醛(10%中性福尔马林)固定液: 甲醛(40%) 100ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 40g 蒸馏水 900nl (2)乙醇一甲醛(洒精一福尔马林,AF)固定液 甲醛(40%) 100ml 95%乙醇 900nl [说明]一般组织块经乙醇一甲醛固定1一2h后,即可移入95%乙醇内脱水。 (3)Carnoy固定液: 无水乙醇 60ml 氯仿 30ml 冰醋酸 10ml [说明]本液是组织化学染色的常用固定液,组织径Carnoy固定液1一2h后,即可移入95%乙醇中脱水。 二、常规石蜡包埋组织切片(常规切片)的制备 (一)制备程序 1、水洗 2、脱水 3、透明 4、浸蜡 5、包埋 6、切片 (二)常规切片的手工操作 1、水洗,用流水冲洗已经固定的组织块30min 2、脱水(常温下) (1)乙醇一甲醛(AF)液固定60~120min (2) 80%乙醇60~120min (3) 95%乙醇Ⅰ60~120min (4) 95%乙醇Ⅱ60~120min (5)无水乙醇Ⅰ30~60min (6)无水乙醇Ⅱ60~120min (7)无水乙醇Ⅲ60~120min 注意事项: (1)未经充分固定的组织不得进入程序; (2)用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5~10倍以上;(3)自低浓度乙醇逐级向高浓度乙醇移进脱水;(4)脱水试剂应及时过滤、更换;(5)较大组织块的脱水时间长于较小者,应将两者分开进行脱水;(6)组织块置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化);(7)丙酮脱水性能强,会使组织块过缩,硬脆,不宜用此替代无水乙醇。 3、透明 (1)二甲苯Ⅰ 20min (2)二甲苯Ⅱ 20min (3)二甲苯Ⅲ 20min 注意事项: (1)二甲苯的容积应为组织块总体积的5一10倍以上;2)组织块在二甲苯中透明时间不宜过长(以防组织硬、脆),并依不同种类的组织及其大小而异;(3)二甲苯应及时过滤更换;(4)组织块经二甲苯适度处理后不显透明时,常提示该组织的固定或脱水不充分,应查找原因并妥善处理。 4、浸蜡 (1)石蜡Ⅰ (56~58℃)60min (2)石蜡Ⅱ (56~58℃)60min (3)石蜡Ⅲ (56~58℃)60min 注意事项:(1)熔化石蜡必须有专人负责,必须在熔蜡箱内或水浴中(70℃)进行,不得用明火加温;(2)熔蜡的容积应为组织块总体积的5~10倍以上;(3)组织块经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程,应尽可能减少将透明后
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