第二章-天然药物化学成分提取分离鉴定方法与技术-色谱法.pptVIP

* 固定相：大孔吸附树脂 高分子聚合物 多孔网状结构 不含交换基团 吸附能力：分子间作用力 氢键 分子筛作用：多孔性质 特点 原理 * 应用： 苷类、皂苷、生物碱、萜类、黄酮等大分子化合物的分离。 洗脱规律和洗脱过程与普通吸附色谱相似： 对极性吸附剂来说，成分极性越大，越难洗脱；洗脱剂的极性越大，越易洗脱。 一、高效液相色谱法 在经典柱色谱法基础上发展起来的一种具有高效、快速、高灵敏特点的色谱分离方法。 * 其他色谱法 高效液相色谱的原理与一般液相色谱十分相似，样品的分离取决于其在流动相和固定相中的分配。 特点是使用高压输液泵进行洗脱，并配备有紫外等检测系统，使分离达到高速化和高效化。 二、气相色谱法 流动相：气体 固定相：液体或固体 基本原理： 利用化学成分在气体与固定相之间吸附能力不同或分配系数不同的差异而分离的色谱分离方法。 适用范围：沸点低、易挥发的挥发油类成分。 * 思考题 1、薄层色谱中，吸附剂、被分离物质及溶剂三者之间的关系如何？ 2、聚酰胺分离下列黄酮类化合物时（以MeOH为溶剂），最先洗脱下来的是（ ） * 3、根据不同性质的化学成分，用连线选择与其相适应的色谱分离方法： 氧化铝吸附柱色谱法 分子量大小不同的化合物 凝胶滤过柱色谱法 碱性亲脂性化合物 聚酰胺吸附柱色谱法 黄酮类化合物 离子交换色谱法 酸性亲脂性化合物 硅胶吸附柱色谱法 离子性化合物 * 谢 谢 ！ * 色谱法起源于20世纪初，1906年俄国植物学家米哈伊尔·茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散为数条平行的色带。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此茨维特将这种方法命名为。1906年Tswett 研究植物色素分离时提出色谱法概念；他在研究植物叶的色素成分时，将植色谱 物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。按光谱的命名方式，这种方法因此得名为色谱法。 * 以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。按操作方式分类，可分为。。。。。 * 试料用量小，分离效率高 * 作用方式 * （1）被分离物质极性越强，吸附力越强。强极性溶质将优先被吸附。 （2）溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质的吸附能力越强。随溶剂极性的增强，则吸附剂对溶质的吸附力将减弱。 （3）当加入极性较强的溶剂后，先前被硅胶或氧化铝所吸附的溶质可被置换而洗脱出来。 * * 间苯三酚，对苯基苯酚，对羧基苯酚，邻羧基苯酚 * 硅胶G（Type 60），在硅胶中含有15％的石膏。其中石膏是粘合剂，字母G为石膏的英文单词gypsum的缩写。Type 60是指硅胶颗粒的孔径为60?（6 x 10-5m ）。 硅胶H，不含有石膏及其他有机粘合剂，但制成薄层色谱板后，亦有一定的粘合力。 硅胶G添加有煅石膏，制成薄层板时依靠靠煅石膏的凝固作用可使薄层板上的硅胶有一定的牢固度，硅胶不容易脱落。硅胶H是指没有添加煅石膏的硅胶，制成的薄层板不牢固，硅胶容易被抹掉，所以不能用手接触板上的硅胶薄层。硅胶GF254是指添加有煅石膏和荧光剂，制成薄板后，在254nm紫外光下，版面呈现明亮的（淡绿色）荧光。一般来说，由于硅胶H制成的薄板没有牢固度，所以很少用它制薄层板； 硅胶G制成的薄板有一定的牢固度，可用于下列物质的分离：（1）本身有色泽的，（2）在紫外光下能显示荧光的（即荧光物质），（3）通过适当的处理可显色的物质。这些物质在适当的条件下都能在硅胶薄板上显示出斑点；硅胶GF254薄板由于本身有荧光，所以不适合荧光物质的分离（因为斑点难以显示和辨别），但是很适合本身没有荧光的物质的分离（由于这些物质在薄板上把荧光覆盖了，所以在254nm紫外光下斑点成暗点，与薄板本身的强荧光形成鲜明的对比，便于辨别斑点），尤其适合于在硅胶G薄板上不易显色、难以辨别斑点的物质的分离。大部分生物碱本身无色，所以要选择合适的硅胶板以便使展开后的斑点容易辨别。对于无荧光性的生物碱，可以选择GF254板，展开后在254nm紫外光下斑点呈暗色，斑点之外有亮绿色的荧光，很容易辨认。对于个别有荧光的生物碱，可以选择硅胶G薄板，展开后在紫外光下，斑点呈现荧光亮点，非斑点处很暗，也很容易辨别、确定斑点的位置。当然也可以采用喷显色剂、碳化等显色方法确定斑点位置，不过因为这种显色方式是基于化学反应，所以具有破坏性，无法回收被展开的物质。 硅胶HF254，与硅胶H一样，