6呼吸酶的简易测定法.doc

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 2015年11月号 课程： 植物生理学实验 题目：呼吸酶的简易测定法 一、实验目的 学习植物呼吸酶的定性鉴定方法 ，了解呼吸酶在植物呼吸代谢中的作用。 二、实验原理 呼吸作用是一系列的氧化还原作用，其中间步骤是靠各种氧化酶和还原酶促进的，根据它们氧化还原反应的特性和特殊的底物或受氢体，于反应后能产生特定的颜色，从而辨别呼吸酶的存在。 三、仪器试剂 1.仪器及用品 培养箱，试管，试管架，移液管，研钵，纱布，漏斗，胶头滴管 2.试剂 （1）3%H2O2 （2）0.025%甲烯兰 （3）液体石蜡 （4）1.5%邻苯二酚 四、实验材料 马铃薯，白菜 五、实验步骤 1．去氢酶 取马铃薯块茎去皮后，切成10块5mm见方的小块，分成两组，分别放进两个试管中，每个试管中各加5mL0.025%甲烯兰溶液，其中一组煮沸10分钟，然后在液面上各加一薄层液体石蜡，以阻止空气进入甲烯兰溶液中。 将试管放入25℃的培养箱中，一天后观察试管内溶液及马铃薯小块颜色的变化，未煮沸试管内甲烯兰溶液会变成无色。然后把试管内液面上的石蜡油吸去，取出管内的马铃薯小块放在纸上暴露于空气中再观察颜色的变化，并说明变化的原因。 2．氧化酶 取马铃薯5g 剪碎放入研钵中，加蒸馏水少许研碎，再加入蒸馏水约15ml混匀，用纱布过滤到一个小烧杯中备用。取两个试管，分别加3ml 上述滤液，其中一个试管先煮沸数分钟，然后各加10 滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液，观察有何现象，如溶液产生褐色、红色、紫色或蓝色，则表示邻苯二酚已经被氧化，氧化程度不同，则产生不同的颜色。用白菜重复上述步骤。 3．过氧化物酶 分别取白菜的滤液3ml加到两个试管中，其中一个试管先煮沸数分钟，然后各加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液和5ml 3%的H2O2的溶液，如有褐色或蓝色产生，即表示过氧化物酶的存在。 4．过氧化氢酶： 取马铃薯块茎去皮，切四块5mm 见方的小块，分为两组，其中一组煮沸10 分钟，然后分别加到盛有5m1 3% H2O2的试管中，观察有什么变化？并加以说明。 六、实验结果及分析 1、去氢酶 实验结果：左边是白菜，右边是马铃薯。实验组溶液均变为褐色，说明白菜和马铃薯细胞中都有氧化酶，且马铃薯中氧化酶的含量和活性高。 3、过氧化物酶 实验结果：左边为未煮沸的试管，右边为煮沸的试管。未煮沸的试管中产生大量气泡，而煮沸的试管中几乎没有气泡。 原因：因为马铃薯种含有过氧化氢酶，可以将H2O2快速分解产生大量O2，而煮沸的试管中，马铃薯中的过氧化氢酶因高温而失活，无法分解H2O2，只有H2O2自身缓慢分解，产生少量气泡。 七、思考题 1、如果植物体含有氧化酶如何鉴定其是否含有过氧化物酶？ 往得到的植物液中加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液，观察反应现象。如果溶液颜色比较深，说明其可能含有过氧化物酶。再往溶液中加5ml3%的过氧化氢溶液，观察现象。如果有大量气泡冒出，这可说明其中含有过氧化物酶。