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中国医科大学学报 第39 卷 第8 期 2010 年8 月 675 Journal of China Medical University Vol.39 No.8 Aug. 2010 · · 两种分离人胎盘间充质干细胞方法的比较 Comparison of Two Methods in the Isolation of Human Placenta-derived Mesenchymal Stem Cells 1 2 3 李昆，于艳秋，李世正 （1. 辽宁医学院 附属第一医院检验科，辽宁 锦州 121001；2. 中国医科大学 基础医学院病理生理教研室，沈 附属第一医院普外科，辽宁锦州121001） 摘要：寻找简便易行的人胎盘间充质干细胞（hPDMSCs）的提取方法。 关键词：胎盘间充质干细胞；组织块培养法；酶消化法 中图分类号：R329 文献标志码：B 文章编号：0258-4646 （2010）08-0675-02 近年来，人们已成功从骨髓、外周血、肌肉、脂肪及胎盘 1.2.2 不同方法分离的hPDMSCs的传代培养：取上述两种 3 2 等组织中分离并鉴定出间充质干细胞（mesenchymalstem方法分离培养的hPDMSCs以每孔5×10个/cm的密度接 cells，MSCs）。其中，hPDMSCs不仅来源广泛，且对其研究不会种于24孔板中。采用胰酶消化台盼蓝染色法，每日取4孔计 涉及伦理道德和法律问题，因此成为寻找人类间充质干细胞 数细胞，绘制细胞生长曲线，细胞达到生长抑制时停止实验。 新来源及提高临床应用效果的研究热点。 目前，hPDMSCs的1.2.3 不同方法分离的hPDMSCs细胞生物学特性的比较 原代培养大多采用常规的酶消化法，但其存在着操作过程繁 流式细胞仪检测细胞表面标记特征：取上述两种方 琐、由于操作过程繁琐致污染机率增加、长时间酶的消化对 法分离培养的细胞进行扩增。扩增至第2代时，流式细胞仪 细胞损伤较大及成本高等弊端。本实验采用组织块培养法， 检测细胞表面CD13、CD14、CD29、CD31、CD44、CD45、CD73、 与常规的酶消化法进行比较，以求得最佳的hPDMSCs原代CD105、HLA-ABC及HLA-DR。 培养方法。 流式细胞仪检测细胞周期：取上述两种方法分离培 养的细胞进行扩增。扩增至第2代时，流式细胞仪检测细胞 1 材料与方法 周期。 1.1 材料 1.2.4 统计学分析 2 1.1.1 标本来源：经产妇同意后，无菌条件下剖宫产的足月 用SPSS10.0统计学软件处理，做χ 检验，P＜0.05为 健康新生儿胎盘组织（来源于辽宁医学院附属第一医院产 差异有显著性。 科）. 2 结果 1.1.2 试剂：DMEM，FBS，非必需氨基酸-谷氨酰胺，青链霉，L 素，β-巯基乙醇，鼠抗人FITC直标单克隆抗体CD29、CD31、 2.1 酶消化法 CD34，鼠血清，PBS。 培养3d左右仅见少量单个贴壁细胞，呈圆形或短梭形， 1.2 方法 培养10d左右，细胞形态逐渐伸展开来，呈长梭形，类似成纤 1.2.1 hPDMSCs的原代培养 维细胞，并逐渐形成漩涡状的集落