四膜虫中存在角蛋白样成分简报.pdfVIP

第 2t卷第 3期 实 验 生 物 学 报 Vo1．24，No．3 1991年 9月 Acta Biologiae Exp~rfmentaHsSinica Septcmher1991 四膜虫中存在角蛋白样成分 (简报) ’ 孙 群 中文虹 张 蒙兴 (南京太学生物系) (中国科学院上海细胞生物学研究所) j · { { 中等纤维是脊椎动物细胞中普遍存在的一 备 【l”。 种细胞骨架成分 【l，在一些无脊椎动物细胞中 四膜虫的电镜整装片的制作方法是t取少 ： ． 也发现有这类成分存在。据报道，枪乌贼的巨 量四膜虫滴于覆膜喷碳的铜网上，空气 中略干 大神经轴突中有神经丝 (neurofia／ment)r“，果 燥，依次用去垢剂一低盐缓冲液 (1 Tritonx一 蝇的组织培养细胞 中有 波 形纤 维 (vimentin 100，0．14mol／LNat1，50mmol／LTris，pH filament)~”，线虫的肌 肉和上皮细胞中也有中 7．4)和去垢剂一高盐缓冲液(1 TritonX-100， 等纤维”】。甚至在高等植物细胞中也发现有中 1．5mol／LKC1，SOmmol／LTris，pH7．4)处 等纤维样的成分存在 [ei,6】。有人推测， 中等纤 理， 各 15分钟，再用蒸馏水洗两次，空气中 维可能存在于所有的真核生物中[1】。 干燥。透射电镜观察。 Numata等人报遒，在四膜虫 (Tetrahyme~ 免疫印迹l按 Numata的方法 将 培养的 pyriJormis)中存在一分子量为 49kD的蛋 白， 四膜虫做成丙酮干粉，用干粉制备电泳样品。 体外可聚合为 14nm的纤维，认为是一种中等 按Towbin等人的方法 I‘S)做免疫印迹，荧光标 纤维蛋白¨】。单细胞真核生 物中是否存在中 记的第二抗体显带，紫外灯下观察、拍照。所 等纤维蛋 白类的成分?如果存在， 又是属于什 用的抗体 与间接免疫荧光染色的相同。分子量 么类型的中等纤维蛋 白?弄清这个 问题对于研 测定所用的蛋 白标准为Pharmacia产品。 究中等纤维蛋 白的起源和进化无疑具有重要的 间接免疫荧光观察结果：整个四膜虫细胞 意义。但到 目前为止，还很少有 这 方面 的报 呈现弱的弥漫性荧光，．口器和基体显示强荧光 道。 (图版 I，图 1)。在用去垢剂处理的样品中， 本文 以四膜虫为材科，用抗人角蛋 白的多 可见同～行相邻的基体之间有纤丝相 连 (图版 克隆抗体进行免疫细胞化学和免疫印迹j去的检 I，图 1左上方插 图)。多数细胞 的 口器上可 测，对上述 问题作一 探 讨 。所 用 的 四膜 虫 见有一向后方伸出的、带有强荧光的纤维——