异育银鲫溶血性腹水病病原的研究.pdf

维普资讯 第 15卷第 2期 水 产 学 报 VoL 15．No．2 JOU~NAL OF FISHERIES OF Ct~ NA June，1991 1991年 6月 异育银鲫溶血性腹水病病原的研究 孙其焕 孙佩芳 垒雨华 吴建农 (上海水产大学) 提 要 本文对上海市郭县和江苏省吴江县的异育银鲫溶血性腹水病 进行了病席分离 和人工感染试验。对致病菌株进行了细菌学鉴定 其分别为运动型气单胞菌的苏伯利气单胞菌 (Aevomonassobrla)和唁水气单胞菌(．hydrophi~a)。通过对人工感染病鱼血清内毒素(En· 4otoxi~)的疆j定 并用菌体破碎灌注射健廉鱼体试验，初步认为病原产生和释放的内毒素类物 质 是使鱼类致病和死亡的主要原因之一。 关键词 异育银鲫，溶血性腹水病，苏伯利气单胞菌 嗜水气单胞菌，鲎试验法 异育银鲫生长快、肉质鲜嫩，在上海市郊广为养殖。但最近几年发生了一 种 新 的 疾 病，尤其在 1989--1990年流行甚广，死亡率很高。它是一种暴发性流行病，使池溏鱼产量 受到极大损失。这种病的主要症状是：体表及眼睛充血，腹部、鳍基 下颚、Iq腔尤为严重， 肝脏肿大量花肝，贫血l部份病鱼肠道克血，肛 门红肿，有的有腹水l少数有突眼、竖鳞等。 由于异育银鲫是我国近年来池溏养殖的新品种．对这一疾病的研究，在 国内外还未见报 导。作者希望本试验结果能对深入探讨该疾病及其病原有所帮助。 材 料 和 方 法 1．病原分离 病原 19 年 9月来 自上海市南汇县新港养殖场；1989年8月来 自于奉贤县朝阳农 场；1989年7月来 自江苏省吴江县平望镇养殖场。使用弧菌培养基 (TYB)“¨及肉什蛋 白胨琼脂。以 无菌操作剪取病鱼肝脏或肾脏一小块 再在无菌水中漂洗三次，并放在平板边缘处 ，用接种环轻压使其 破碎 作平板量线分离。在 28~C下培养丝小时。在平板上出现较多形态一致的小苗落，选取单个菌落接 神辩面。再进行平板划线 直至获j导纯培养，供试验用。 2．^工感染试验 (1)注射感染 纯培养接种在TYE或肉什蛋自腺琼脂平板上。培养 18小时后 用无菌生理盐水 洗下，制成苗悬液。用比浊管稀释成 MCF8号管浓度或以活苗计数测得感染浓度 为 2．3×101／ml。对 每尾为 11O一245克的健康鱼体以不同剂量进行背肌及腹腔注射。饲养在 25--26~C的水族箱内。 (2)浸泡感染 菌{蓰以{靛体 16小时(2e。C)培养。对每尾为u 135克健康鱼体进行两种方式感 土海水产大学蔡完其副教授、湖南农业大学肖克字同意参拥部份工作；参加部份工作的尚有上海水产大学磕 宏达同志、收养85、86属学生 马志宏、王华、陈奇志、江庆生；上海水产大学张敏、周孝康同志协助拍摄照片 ， 在工作中得到复旦大学黄静娟副教授 、棘镍强同志的大力帮助和菌株 DNAG+coto1％的测定；上海第= 军医大学焦炳华尉教授 、周炳荣同志对内毒素溯定工作的帮助；菌种鉴定得到中国科学院北京微生物研究所 蔡妙英研究员的指导。在此一并致谢。 牧稿年月 ：1g90年 11月 ；1眦 年 】月修改。 维普资讯 2期 孙其焕等：异育银鲫溶血性腹水病病原的研究 131 染：①在细菌培养原液(活菌计数浓度为7x10。／m1)中浸泡十分钟，取出后放入清水中饲养(水温 ℃)。 @菌液加入水族箱中，使鱼体始终接触细菌，水族箱的水体申含菌量为括菌计 数 1．3×10‘／ml(水温 ℃) 浸泡感染前每尾鱼均拔击1—2鳞片 5．生理生化特性的测定 参照有关文献进行 ~1,5,151。 4 菌株 DNA 的提取爱 DNA 的 G+Cmol 的测定 采用溶菌酶和