3种细胞培养流感病毒的比较.pdfVIP

动物医学进展 。2009，30(11)：76—79 ProgressinVeterinaryM edicine 3种细胞培养流感病毒的比较 杨 琴 ，张兴 晓，杨灵 芝 (山东滨州博莱威生物技术研究所 ，山东滨州 256600) 摘 要：将流感病毒分别接种于鸡胚成纤维细胞 (CEF)、Veto和 MDCK 细胞 ，并改变细胞维持液 中 FBS浓度，然后检测胰酶的用量、细胞培养流感病毒的最佳时间、细胞接种病毒最佳吸附时间和接种剂量、 收获细胞液后的血凝素(HA)滴度。结果表明，胎牛血清对病毒的繁殖有明显抑制作用；加入约4 g／mL的 胰酶可提高病毒产量。最佳收获时间为 60h～72h，吸附时间为 90min，接种剂量为 0．1mL／L；CEF、MD— CK细胞上病毒 HA滴度高于Vero细胞。 关键词：鸡胚成纤维细胞 ；Vero细胞；MDCK细胞；流感病毒 中图分类号 ：$852．659．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2009)11-0076—04 禽流感是 目前危害世界养禽业发展的重要疾 术研究所保存 ，经PCR检测为阳性。 病，特别是高致病性禽流感 的暴发，给养禽业带来了 1．1．3 培养基及相关材料 MEM 培养基为北京 毁灭性的灾难。2004年至今，中国内地相继暴发高 清大天一生物公司产品。 致病性禽流感 ，不仅沉重打击了国内的养禽业，而且 新生牛血清购 自上海洛神生物公司；胎牛血清 对我国的经济和贸易发展也造成了严重的影响L1]。 购 自杭州 四季青生物公司；胰蛋 白酶购 自AMRES— 自1933年鸡胚培养流感病毒获得成功 以来 ，鸡 CO公司。 胚就成人们大量获得流感病毒 的主要来源。但用鸡 1．2 方法 胚分离流感病毒或传代易引起病毒变异，而且鸡胚 1．2．1 FBS含量对细胞培养流感病毒 HA滴度影 残留物还可引起过敏性反应 。鸡胚作为疫苗生产基 响的检测 将长成致密单层 的CEF、Vero和 MD— 质 ，还存在大规模生产时供给和潜在外源病毒污染 CK细胞以PBS洗涤 3次后，接种病毒，维持液中分 问题 。近几年，随着禽流感的频繁暴发 以及跨种属 别加入 0、20、50、80、100mL／L的FBS，收获后 ，采 传播 ，人们认识到需要研究一种可在流感大流行时 用常规的微量红细胞凝集试验检测病毒的 HA滴 能够替代鸡胚快速、大量生产流感病毒的细胞培养 度。 系统 。 1．2．2 接种病毒含量对细胞培养流感病毒HA滴 应用鸡胚成纤维 (chickenembryofibroblast， 度影响的检测 将长成致密单层 的CEF、Vero和 CEF)细胞 、Vero细胞系和 MDCK细胞系培养流感 MDCK细胞以PBS洗涤 3次后 ，分别按 10、1、0．1、 病毒解决 了鸡胚蛋 白遗 留物和外源病毒污染 的问 0．01、0．05mL／L接种到不 同的细胞 中，吸附 lh 题 ，且培养的病毒免疫原性更稳定 ]。本试验 旨在 后，加入无血清维持液 ，收获后，采用常规的微量红 细胞凝集试验检测病毒的HA滴度。 探讨A1型流感病毒在 3种细胞系培养的可行性 ， 并确定最佳细胞用培养条件。 1．2．3 病毒在细胞 中吸附时间对流感病毒 HA滴 度影响的检测 将长成致密单层的CEF、Vero和 1 材料与方法 MDCK细胞 以PBS洗涤 3次后，接种病毒含量为 1．1 材料 0．1mL／L的流感病毒，吸附时间分别为 3O、6O、9O、 1．1．1 细胞系 Vero细胞，MDCK细胞 由山东滨