转座子标签法克隆分离植物基因的研究进展.pdfVIP

维普资讯 生物技 术通报 · 综 述 与 专 论 · BfoTj1CHf、o『I，0Gy BULLETJN 2003年 第 2期 转座子标签法克隆分离植物基因的研究进展 胡英考 (首都师范大学生物系 ，北京 100037) 摘 要： 转座子标签法是克隆与分离植物基因的一项十分有效的方法。概述 了转座子标签技术克隆与分离 植物基 因的基本原理与方法，介绍了可用于转座子标签技术的转座子，对于转座子标签系统 以及在 克隆与分离异 源植物基因方面的主要成就进行 了综述，并对将来的研究方向进行 了讨论。 关键词 ： 转座子 转座子标签 基 因克隆 ProgressofPlantGenesCloningand Isolation byTransposonTagging HuYingkao (B／o／ogyDepartmentofCapitalNormalUniversity，Beijing100037) Abstract： TransV~ontaggingisaJleffectivemethodforplantgenecloningandisolation．Thepdndpleandproce— dureoftransposontagginga1esl皿nn lIizedandthetransp3s3nusedforplantgenecloningand isolationareintroducedin thispaper．Theprogressoftranspc~ntagging system nadalloplnatgenecloning nadisolationwerereviewed．Theper— spectiveoftranslx~ontagging wasalsodiscussed． Keywords： Tmnsl~SOn Tmnsl~SOntag画ng Gened0|1ing 分子生物学的迅速发展，为人们提供 了许多分 到 1967年在大肠杆菌中发现插入序列这类转座 因 离植物基因的有效方法。传统上 ，可根据 已知基因 子后才被普遍承认和接受，现在我们知道 ，转座子在 的产物推测其相应的核苷酸序列 ，再据此序列合成 生物界是普遍存在的。 寡核苷酸探针，从 cDNA文库或基 因组文库中钓取 转座子是染色体上一段可 以移动的 DNA序 目的基 因，此 即所 谓 的功 能 克 隆 (functional 列，它可以从一个基因座位转移到另一个基因座位 ， cloning)。近年来，表 型克隆 (phenotypicalcloning) 当转座子插入到某个功能基因内部或邻近位点时， 发展十分迅速 ，它是根据材料间表型的差异，来克隆 就会使插入位置的基因失活并诱导产生突变型，通 引起这种差异的基因的方法。但是，在大多数情况 过遗传分析可以确定某基因的突变是否由转座子引 下，我们既不知道基因的表达产物 ，又没有适宜的相 起，由转座子引起的突变可用转座子 DNA为探针 ， 对表型用于表型克隆，此时最常用 的基因克隆技术 从突变株的基 因组文库中钓取含该转座子 的DNA 是 图 位 克 隆 (map-based cloning or positional 片段，获得含有部分突变株 DNA序列的克隆，然后 cloning)[1J和转座子标签 (transposontag~ng)技 以该 DNA序列为探针，筛选野生型植株的基因组 术 22【J。以下仅对转座子标签技术在植物基因克隆 文库 ，最终得到完整的 目的基 因3。在转座子作为