弓形虫棒状体蛋白16的原核表达及多克隆抗体制备 - 江苏大学.pdf

第２５卷第３期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２５ Ｎｏ．３ 　 ２０１５年５月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｙ２０１５ 　 　 　 　 　 　 弓形虫棒状体蛋白１６的原核表达及多克隆抗体制备 １ １ １ １ １ １ １ １ １ ２ 刘原 ，杨华 ，吴亮 ，苏丹华 ，付涛 ，郭雪 ，刘曼 ，姜旭淦 ，陈盛霞 ，曹建平 （１．江苏大学医学院，江苏 镇江２１２０１３；２．中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海２０００２５） ［摘要］　目的：克隆刚地弓形虫ＲＨ株速殖子棒状体蛋白（ｒｈｏｐｔｒｙｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＯＰ）１６基因，并构建ＲＯＰ１６基因的原核 表达系统，检测和定位 ＲＯＰ１６蛋白的表达。方法：以弓形虫 ＲＨ株速殖子基因组 ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增弓形虫 ＲＯＰ１６基因，克隆至ｐＥＴ３２ａ（＋）载体，在大肠埃希菌Ｒｏｓｅｔｔａ中诱导表达。经ＫＣｌ染色切胶法纯化重组ＲＯＰ１６蛋白， 并制备其兔多克隆抗体。采用蛋白质印迹法和间接免疫荧光法检测和定位ＲＯＰ１６在弓形虫速殖子内的表达。结果： 成功表达并纯化重组ＲＯＰ１６蛋白，制备了其多克隆抗体。蛋白质印迹法检测出相对分子质量为７４０００的特异性条 带，间接免疫荧光实验显示ＲＯＰ１６分布于弓形虫速殖子胞质内。结论：经原核表达重组ＲＯＰ１６制备的多克隆抗体能 检测和定位ＲＯＰ１６在弓形虫速殖子内的表达。 ［关键词］　刚地弓形虫；棒状体蛋白１６；原核表达；ＫＣｌ染色切胶 ［中图分类号］　Ｒ３８２．５　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１５）０３－０２５１－０５ ＤＯＩ： １０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１４０２９６ Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆ ｒｈｏｐｔｒｙｐｒｏｔｅｉｎ１６ｆｒｏｍＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ １ １ １ １ １ １ １ １ ＬＩＵＹｕａｎ，ＹＡＮＧＨｕａ，ＷＵＬｉａｎｇ，ＳＵＤａｎｈｕａ，ＦＵＴａｏ，ＧＵＯＸｕｅ，ＬＩＵＭａｎ，ＪＩＡＮＧＸｕｇａｎ， １ ２ ＣＨＥＮＳｈｅｎｇｘｉａ，ＣＡＯＪｉａｎｐｉｎ （１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２０１３；２．ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰａｒａｓｉｔｉｃＤｉｓｅａｓｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅ ＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００２５，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｃｌｏｎｅａｎｄｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｏｆｒｈｏｐｔｒｙｐｒｏｔｅｉｎ （ＲＯＰ）１６ｆｒｏｍｔａｃｈｙｚｏｉｔｅｓｏｆＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）ＲＨｓｔｒａｉｎｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ａｎｄｔｏｄｅｔｅｒ ｍｉｎｅａｎｄｌｏｃａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＯＰ１６ｉｎｔａｃｈｙｚｏｉｔｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＲＯＰ１６ｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍ ｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆＴ．ｇｏｎｄｉｉＲＨｓｔｒａｉｎａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐｌａｓｍｉｄｐＥＴ３２ａ（＋）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅ ｃｏｍｂｉｎａｎ