第16章抗生素类药物的分析2012.ppt

第二节 第三节 第四节 Add your company slogan 1、茚三酮反应——α-氨基、羟基胺类 茚三酮 Δ 蓝紫色 链霉素 庆大霉素 三、鉴别 2、Molisch 试验 红紫色 羟甲基糠醛 五碳糖或六 碳糖结构 蓝紫色 3、N-甲基葡萄糖胺反应（Elson-Morgan反应） 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 红色 乙酰丙酮 OH- 对二甲氨基苯甲醛 H+ 樱桃红色 4、麦芽酚反应 H+ 5、坂口反应——链霉胍特有反应 链霉素 OH- 水解 8-羟基喹啉 NaOBr 或α-萘酚 链霉胍 橙红色 链霉糖特有反应 坂口反应 麦芽酚反应 N-甲基葡萄 糖胺反应 7、色谱法 6、硫酸盐反应 8、光谱法 TLC HPLC UV IR 1、链霉素中链霉素B（甘露糖链霉素）的检查 来源：发酵中产生 方法：TLC中的对照品法 2、硫酸奈替米星中西索米星的检查(TLC) 4、庆大霉素C组分的测定 四、杂质检查 3、硫酸盐测定——EDTA滴定与HPLC BP(2005)——HPLC-ECD Ch.P——HPLC-ELSD USP-------HPLC-UV 1）色谱条件 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相：水-冰醋酸-甲醇(25:5:70) 配制的0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液 检测波长：330nm 系统适用性试验： 理论板数：按C2组分峰计算应不低于2000。 分离度：C2a 峰和C2 峰的分离度应符合要求。 2)测定法 A、0.65mg/ml的样品溶液，精密量取10.0 ml，置量瓶中，加异丙醇2ml与邻苯二醛试液1.6ml，用异丙醇稀释至刻度，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，冷却，滤过，取续滤液10μl 注入液相色谱仪，记录色谱图 B、庆大霉素标准品，同法测定。C组分的保留时间依次为：C1、C1a、C2a、C2。量取C1、C1a、C2a、C2的峰面积。 3）结果 C1应为25％～50％，C1a应为10％～35％，C2a＋C2应为25～50％ 。 庆大霉素无紫外吸收，需衍生化处理后再进行HPLC测定。 λmax = 330nm 4）讨论 1、柱效：以C2峰计算，理论板数应不低于2000，在此柱效下各组分之间才能达到规定的分离度。为此色谱柱做适当选择。 2、流动相：流动相极性适当控制，极性过强，出峰快，分离不佳。C1峰与衍生试剂等杂质峰难分析;极性过弱，出峰太慢。实验表明，C2峰的保留时间控制在20min～30min较为适宜。 3、衍生化试剂与衍生物的稳定性：配制后不能久置，生成的衍生物不稳定。一般避光保存可使用三天。 4、离子对试剂浓度影响：离子对试剂浓度对庆大霉素OPA衍生物保留值有影响。 微生物检定法 HPLC法 五、含量测定 HPLC法 HPLC-蒸发光散射法测定硫酸依替米星含量 1、色谱条件和系统适用性试验： 固定相：C18 流动相：0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（84：16） 检测器：蒸发光散射检测器 依替米星和奈替米星混合对照溶液进样：分离度＞1.2 重复性（C2b）：RSD ＞2.0% HPLC蒸发光散射法测定硫酸依替米星含量 2、测定： 依替米星对照溶液： 1.0mg/ml、 0.25mg/ml 、 0.5mg/ml 。 样品溶液：含依替米星约0.5mg/ml 的溶液。 取对照溶液20ul，进入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对数值和浓度对数值计算回归方程，r＜0.99。 取样品溶液：同法测定，计算依替米星含量。 复 习 题 （一）、选择题 1、硫酸庆大霉素含量（效价）测定方法应采用 　 A.微生物检定法 B.四氮唑比色法 C.汞量法 D.酸性染料比色法 E.柯柏反应比色法 2、庆大霉素无紫外吸收，美国药典采用HPLC法测定C组分时采用什么方法检出 A、三氯化铁显色法 B、邻苯二醛衍生化法 C、硫醇汞盐法D、柱后衍生化法 E、荧胺衍生化法 3、下列有关庆大霉素叙述正确的是（ ） A、在紫外区无吸收 B、无茚三酮反应 C、有麦芽酚反应 D、庆大霉素是由庆大霉素C1 、C2构成的复合物 E、在230nm处有紫外吸收 5、庆大霉素C组分的测定采用紫外检测器是利用 A C组分的紫外吸收性质 B C组分受紫外光激发荧光 C 邻苯二醛衍生化后具紫外吸收 D C组分与流动相作用具紫外吸收 E C组分分离过程后具紫外吸收 6、下列反应属于链霉素特征鉴别反应的是（ ） A 、茚三酮反应 B 、麦芽酚反应 C 、有N-甲基葡萄糖胺反应 D 、硫酸-硝酸呈色反应 E、三氯