结核分枝杆菌（tb-sa）.ppt

结核诊断新技术的理论探讨 刘军 博士 加拿大多伦多大学医学遗传和微生物系 终身教授 多伦多大学肺结核和艾滋病研究中心 主任 加拿大McLaughlin 分子医学中心 科学家 加拿大国立卫生研究院 研究员 中国国家自然科学基金国家杰出青年(海外) 成都永安制药有限公司 研发总监 世界结核病疫情 目前全球1/3的人口（约20亿）已经感染了结核菌，每一秒钟就会产生一位新的感染者，如不控制，近10年将有3亿人受感染. 全球有2000万人患结核病，每年新发病人数达800-1000万人，全球每年约300万人死于结核病。与艾滋病、疟疾并列为影响全球健康的三大传染病杀手. 与艾滋病形成致命的交叉感染– 30%的HIV携带者死于结核. 耐药结核在全球的出现和持续增加 (~20%), 严重威胁目前结核的有效治疗 我国结核病疫情 中国结核病患者数量居世界第二位，每年因结核病死亡的人数大大超过其他传染病死亡人数的总和，且中国人群结核分枝杆菌感染人数达到5.5亿。 ——（卫生部副部长王陇德2006年新闻会客厅语） 我国结核病疫情 我国2003年对结核病的治愈率平均已达到87%以上，但对结核病的发现率约为29%。 发现率极低已成为我国有效控制结核病大规模传染的最大障碍和隐患！！！ 世界卫生组织已向我国明确提出，要求尽快将结核发现率提高到70%以上。 结核病传统的常规诊断方法 结核病诊断方法现状 菌阳肺结核病诊断: 痰涂片, 痰培养方法:敏感性(检出率)低, 时间长,肺外结核、排细菌较少的结核病人诊断困难，几乎很难检测到 菌阴肺结核病诊断:皮下结核素,X-光方法, 病理综合诊断:敏感性(检出率)低, 特异性差, 假阳性高 同时使用以上四种诊断方法对疑似病人进行筛选，在中国的发现率低于30%. 全球目前对于菌阴结核的诊断没有有效和统一的方法和标准. 而菌结核可占结核病人的60-70%. 结核病诊断方法发展趋势 目前国际学术界正竭力寻找： 特异性高的结核分枝杆菌抗原 结核分枝杆菌特异性靶位DNA序列 以便作为免疫诊断或分子生物学诊断的基础，为准确诊断结核病提供依据。 现有血清诊断方法的缺陷 其他选用抗原：14 kDa, MPT63, 19 kD, MPT64, MPT51, MTC28, A85B, KatG, Esat-6等 灵敏度不够高：12-58%，尤其是菌阴病人 容易产生假阳性： 所选用的抗原在非结核分枝杆菌, 尤其是环境中的分枝杆菌 (environmental mycobacteria)中也存在, 从而导致交叉反应 血清诊断的理想抗原- TB-SA蛋白抗原 TB-SA具有极高的特异性，只存在于结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和与其紧密相关的同类致病菌中。 TB-SA基因的表达，只有在结核杆菌侵入人体巨噬细胞（macrophages）内才发生。排除接种卡介苗的人群对实验结果的影响，有效控制假阳性。 TB-SA抗原蛋白是一种分泌性蛋白，容易被机体识别并引起免疫应答从而产生特异性抗体，是结核分枝杆菌血清诊断的理想抗原。 PCR检测的理想对象 -TB-SA基因 TB-SA基因只存在于结核分枝杆菌和其它几种致病的分枝杆菌中，具有极高的特异性，可以避免由非致病的分枝杆菌和其它不相关细菌而引起的交叉反应； TB-SA基因是结核杆菌染色体上的基因，不是移动子，因此在所有的结核分枝杆菌菌株中都稳定存在。 TB-SA同源基因的DNA序列不完全一致，因此可以通过设计引物而检测DNA序列有差别的片段将结核杆菌从其它分枝杆菌中区分出来。 CYPCO试剂的研究基础 在上述研究的基础上与成都永安制药有限公司成功开发出 结核分枝杆菌抗体（IgG）检测试剂盒（酶联免疫法） 结核分枝杆菌（TB-SA）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 CYPCO试剂的临床研究 临床研究单位——多中心 北京结核病胸部肿瘤医院（组长单位） 山东省胸科医院 成都市结核病防治院 临床研究考核方法——采用双盲法 临床考核对象 细菌学检查及临床诊断为结核病患者（菌阳、菌阴、肺外结核）； 细菌学与临床诊断为非结核病的呼吸系统疾病或肺癌患者； 无肺部疾患的健康志愿者。 临床研究样本量远远大于国内外文献中所报道的临床试验 结核分枝杆菌抗体（IgG）检测试剂盒（酶联免疫法）临床应用考核 提高了菌阴结核病及肺外结核病的检出率 结 论 对菌阴肺结核和肺外结核诊断价值高。 与传统的涂片法和培养法比较，该方法明显提高结核病的阳性检出率，具有统计学