cε3-cε4 蛋白核酸适配子筛选与鉴定screening and - 药学学报.pdf

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2017-09-02 发布于天津
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cε3-cε4 蛋白核酸适配子筛选与鉴定screening and - 药学学报

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 12, 47 ( 12): 1605 1611 ·1605 · C 3-C 4 白核酸适配子筛选与鉴定 1* 1 2 1 1 刘中成 , 赵丽君 , 张艳芬 , 时海浪 , 解瑶 (河北大学 1. 药学院, 河北省药物质量分析控制实验室, 2. 实验室管理办公室, 河北保定 071002) 摘要: 设计并合成随机ssDNA 文库, 以硝酸纤维素膜为筛选介质, 利用SELEX 技术筛选人C 3 C 4 蛋白特异性高亲和力核酸适配子, 通过对退火温度、循环次数及靶蛋白与 ssDNA 摩尔比等关键参数进行优化, 建立了适合的筛选体系。ELISA 定各适配子亲和力, 获得了人 C 3 C 4 蛋白高亲和力、高特异性适配子, 并分析了其一级结构和二级结构。以所获高亲和力适配子分别作为捕获适配子和检适配子, 建立了酶联适配子吸附试验 (enzyme-linked aptamers sorption assay, ELASA) 方法, 灵敏度达到 120 ng ·mL 1, 可用于人IgE 的定量检。关键词: 配体指数级富集系统进化; 免疫球蛋白E; 适配子; 酶联适配子吸附试验中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 05 13-4870 (20 12) 12- 1605-07 Screening and characterization of aptamers of C 3 C 4 protein 1* 1 2 1 1 LIU Zhong-cheng , ZHAO Li-j un , ZHANG Yan-fen , SHI Hai-lang , XIE Yao (1. College of Pharmaceutical Sciences of Hebei University, Key Laboratoryf or Drug Quality Control and Analys is of Hebei Province, 2. Laboratory Management Office of Hebei University, Baoding 071002, China) Abstract: In order to obtain nucleotides aptamers bind to IgE, 80 bp nucleotides single-stranded DNA library containing 40 random nucleotides was designed and synthesized. Oligonucleotides th