牛早期胚胎发育中aid 基因的表达及其调节区dna 甲基化的动态变化.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 7 :242-249 牛早期胚胎发育中 AID 基因的表达及其调节区 DNA 甲 基化的动态变化 奥旭东  萨如拉  王杰  王会敏  于海泉 （内蒙古大学实验动物研究中心，呼和浩特 010021） 摘 要 ： 以具有DNA 主动去甲基化作用的活化诱导胞苷脱氨酶 （Activation-induced cytidine deaminase，AID， 亦称为 AICDA）基因为研究对象，检测其在牛卵母细胞及体外受精胚胎发育不同阶段的表达变化及其调节方式，揭示细胞重编程分子机 制。应用Real-time PCR、BSP（Bisulfite Sequencing PCR）和免疫荧光化学等方法分析DNA 甲基化对牛早期胚胎发育中 基因表 AID 达的影响。结果显示， 基因在牛早期胚胎发育中受DNA 甲基化的调控， 基因的T-DMR（tissue-dependent and differentially AID AID methylated region）位于其转录起始位点-88 bp － -431 bp。在牛卵母细胞成熟过程中，T-DMR 第2 和第3 号CpG 位点的DNA 甲基 化明显去除，而其他位点都未发生变化。卵母细胞在成熟过程中 基因的积累与DNA 甲基化状态变化相关。在牛体外受精胚发 AID 育早期的各阶段，尽管AID 基因的表达不同，但AID 基因T-DMR 除第2 和第3 号CpG 位点一直都维持去甲基化状态外，其他位 点始终维持甲基化状态。推测其表达的变化可能是胚胎基因组激活有关。以上研究表明， 基因T-DMR 的低甲基化与其表达存 AID 在一定的相关性。通过免疫荧光检测发现，从卵母细胞成熟期到桑椹胚期，AID 蛋白都是均匀分布于细胞核和细胞质中。而囊胚 时期大量AID 蛋白集中于内细胞团，这可能对于内细胞团多能性的维持起重要作用。综上所述，牛卵母细胞成熟中积累的AID 作 用于受精过程，其启动子区的DNA 去甲基化与AID 基因的表达有关，胚胎基因组激活后AID 基因的表达可能与胚胎发育有关。 关键词 ： AID 基因 ；牛体外受精胚胎 ；DNA 甲基化 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.07.034 Expression of AID and Dynamic Changes of Its DNA Methylation in Regulation Region During Bovine Early Embryonic Development AO Xu-dong SA Ru-la WANG Jie WANG Hui-min YU Hai-quan （