测定豆类胰蛋白酶抑制剂活性和种类的电泳方法改良 - 大豆科学.pdf

第２９卷　第２期 大 豆 科 学 Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．２ ２０１０年　 　４月 ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥ Ａｐｒ．　　２０１０ 测定豆类胰蛋白酶抑制剂活性和种类的电泳方法改良 黄国伟，巫光宏，何嘉雯，吴奕文，陈晓峰 （华南农业大学 生命科学学院，广东 广州 ５１０６４２） 摘　要：以赤豆胰蛋白酶抑制剂（ＡＢＴＩ）及绿豆的胰蛋白酶抑制剂（ＭＢＴＩ）为材料，采用明胶ＰＡＧＥ技术对其进行活 性和种类检测。同时对影响明胶ＰＡＧＥ技术体系的明胶浓度、酶解时间、脱酶液及电泳的灵敏度等因素进行探讨。 结果表明：改良后的明胶ＰＡＧＥ技术，鉴定胰蛋白酶抑制剂活性和种类的时间大大缩短，成本低，技术操作可行性 强，重复性好，且检测 ＡＢＴＩ的种类达７种，灵敏度达到每孔 １．０ＢＡＥＥ、蛋白点样量为每孔０．１５４ ｇ。 μ 关键词：胰蛋白酶抑制剂；明胶ＰＡＧＥ；灵敏度 中图分类号：ＴＳ２０１．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１０００９８４１（２０１０）０２０３１５０４ ＡｎＩｍｐｒｏｖｅｄＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＭｅｔｈｏｄｆｏｒＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓＡｃｔｉｖｉ ｔｉｅｓａｎｄＶａｒｉｅｔｙｆｒｏｍＢｅａｎ ＨＵＡＮＧＧｕｏｗｅｉ，ＷＵＧｕａｎｇｈｏｎｇ，ＨＥＪｉａｗｅｎ，ＷＵＹｉｗｅｎ，ＣＨＥＮＸｉａｏｆｅｎｇ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＴＩ），ａｍａｊｏｒａｎｔｉｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｆａｃｔｏｒ，ｉｔ’ｓｖａｒｉｅｔｙａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒｔｈｅｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｆａｃｔｏｒｓｉｎｄｉｅｔｂｅａｎ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｖａｒｉｅｔｙｏｆＡｄｚｕｋｉ ＢｅａｎＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＡＢＴＩ）ａｎｄＭｕｎｇＢｅａｎＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＭＢＴＩ）ｂｙｍｅａｎｓｏｆｇｅｌａｔｉｎＰＡＧＥｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；ａｎｄｅｘ ｐｌｏｒｅｄｔｈｅｖａｒｉｏｕｓｆａｃｔｏｒｓｏｆａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｇｅｌａｔｉｎＰＡＧＥ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｇｅｌａｔｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｎｚｙｍｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｉｍｅ，ｔｈｅｓｅｃｔｏｒ ｏｆｒｉｎｓｅｅｎｚｙｍｅｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄｇｅｌａｔｉｎＰＡＧＥｃｏｕｌｄｄｅ －１ －１ ｔｅｃｔ７ｔｙｐｅｓｏｆＡＢＴＩ，ｉｔｓｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｒｅａｃｈｅｄ１．０ＢＡＥＥ·ｈｏｌｅ ｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｍｐｌｉｎｇｖｏｌｕｍｅｏｆ０．１５４ ｇ·ｈｏｌｅ ．Ｔｈｅ μ ｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｈａｄｍａｎｙａｄｖａｎｔａｇｅｓｓｕｃｈａｓｔｉｍｅａｎｄｃｏｓｔｓａｖｉｎｇ，ｅａｓｙｔｏｏｐｅｒａｔｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ｇｅｌａｔｉｎＰＡＧＥ；ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ 　　胰蛋白酶抑制剂（Ｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＴＩ）是一类 １　材料与方法 可以抑制胰蛋白酶水解活性的小分子多肽。ＴＩ广 泛存在于豆类中，过去一直认为ＴＩ是一种抗营养因