钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅱδrna干扰对下游基因 - 第三军医大学学报.pdf

２２ 　　　　　　　　　　　　　　第三军医大学学报，２０１７，３９（１）　　 　　　　　　ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　 ＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１６０７０９２ 钙离子／钙调蛋白依赖性蛋白激酶 ＲＮＡ干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响 Ⅱδ １ １ １ １ １ ２ 刘娟娟 ，董　伟 ，戚孟春 ，冯晓洁 ，李　任 ，孙　红 　　（０６３０００河北 唐山，华北理工大学：口腔医学院口腔颌 １ ２ 面外科教研室 ，基础医学院病理学教研室 ） ２＋ 　　［摘要］　目的　研究钙离子／钙调蛋白依赖性蛋白激酶 （Ｃａ ／Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ Ⅱδ Ⅱ ，ＣａＭＫ ）ＲＮＡ干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响，以证实其在破骨细胞分化中的作用。 δ Ⅱδ 方法　应用慢病毒构建ＣａＭＫ ＲＮＡ干扰载体，并确定最佳感染复数（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ＭＯＩ）值 Ⅱδ 及转染效率。小鼠ＲＡＷ２６４．７细胞分为对照组、空白载体组和干扰组。转染５ｄ后收获细胞，确定干扰 效率；并检测ＲＮＡ干扰对活化Ｔ细胞核因子蛋白ｃ１（ＮＦＡＴｃ１）、抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）、非受体 酪氨酸激酶（ｃＳｒｃ）基因表达及破骨细胞分化的影响。结果　成功构建了ＣａＭＫ ＲＮＡ干扰载体，最 Ⅱδ 佳转染ＭＯＩ值为３０，转染效率可达７８％（Ｐ＜０．０５）。重组病毒对ＣａＭＫ 的干扰效率在ｍＲＮＡ水平 Ⅱδ 超过７８％，在蛋白水平超过７０％（Ｐ＜０．０１）。ＣａＭＫ ＲＮＡ干扰显著降低ＮＦＡＴｃ１、ＴＲＡＰ和ｃＳｒｃ基 Ⅱδ 因，与对照组、空白载体组比较，其 ｍＲＮＡ水平下降分别超过了４７．８％、４３３％ 和４８．５％（Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１），蛋白相对水平分别超过了６１．１％、４８．２％和３９．６％％（Ｐ＜００１）；免疫荧光细胞化学检测也 得到相似结果。ＣａＭＫ ＲＮＡ干扰也显著降低了破骨细胞生成及骨吸收功能；与其他两组比较，干扰 Ⅱδ 组破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积下降分别超过了４９．８％、４７．６％和６１．３％（Ｐ＜０．０１）。 结论　ＣａＭＫ ＲＮＡ干扰可显著下调其下游 ＮＦＡＴｃ１、ＴＲＡＰ、ｃＳｒｃ基因表达并抑制破骨细胞分化； Ⅱδ ＣａＭＫ 在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。 Ⅱδ 　　［关键词］　 破骨细胞；钙离子／钙调蛋白依赖性蛋白激酶 ；ＲＮＡ干扰；活化Ｔ细胞核因子蛋白 Ⅱδ ｃ１；抗酒石酸酸性磷酸酶；非受体酪氨酸激酶 　　［中图法分类号］　Ｒ３２２．７１；Ｒ３２９．２；Ｒ３９４．２ ［文献标志码］　Ａ ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＣａＭＫ ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｔｓｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｍｏｌｅｃｕｌｅｓ Ⅱδ ａｎｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １ １ １ １ １ ２ １ ＬｉｕＪｕａｎｊｕａｎ，ＤｏｎｇＷｅｉ，ＱｉＭｅｎｇｃｈｕｎ，ＦｅｎｇＸｉａｏｊｉｅ，ＬｉＲｅｎ，ＳｕｎＨｏｎｇ（