重组人长效促卵泡激素fsh￣ctp 的纯化工艺研究及 - 生物技术进展.pdf

生物技术进展 ２０１６年　 第６卷　 第３期　 ２１９~２２３ 研究论文 Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　 ＩＳＳＮ２０９５￣２３４１ Ａｒｔｉｃｌｅｓ 重组人长效促卵泡激素ＦＳＨ￣ＣＴＰ 的纯化工艺研究及鉴定 刘晓航ꎬ　 高丽婷 北京双鹭药业股份有限公司ꎬ北京 １００１４３ 摘　 要: 为了获得高纯度的重组人长效促卵泡激素ＦＳＨ￣ＣＴＰꎬ收集表达ＦＳＨ￣ＣＴＰ 的ＣＨＯ细胞培养上清ꎬ经过染料亲和 层析、ＤＥＡＥ 阴离子交换层析以及疏水层析三步层析制备ꎬ所得样品进行分子量、等电点测定和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 鉴定ꎬ雌性 大鼠卵巢增重法测定体内生物活性ꎮ 结果显示:经３步纯化所得样品纯度可达９８％以上ꎬ表观分子量约为４７ ｋＤａꎬ ＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ￣ＭＳ测得结果为３５.２ ｋＤａꎬ等电点４.０~２.８ꎬＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ结果呈阳性ꎬ测活结果表明ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ 的活性比重组 人卵泡刺激素明显偏高ꎮ 纯化所得样品纯度良好ꎬ为该药物的进一步研究打下了基础ꎮ 关键词: 不孕不育症ꎻＦＳＨ￣ＣＴＰꎻ分离纯化ꎻ雌性大鼠卵巢增重法 ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５￣２３４１.２０１６.０３.１２ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｒａｉｓａｌ ｏｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｌｏｎｇ￣ａｃｔｉｎｇ Ｆｏｌｌｉｃｌｅ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ　 ＬＩＵ Ｘｉａｏ￣ｈａｎｇꎬＧＡＯ Ｌｉ￣ｔｉｎｇ Ｂｅｉｊｉｎｇ ＳＬ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ. Ｌｔｄ.ꎬＢｅｉｊｉｎｇ １００１４３ꎬＣｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｌｏｎｇ￣ａｃｔｉｎｇ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ＦＳＨ￣ＣＴＰꎬｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ＣＨＯ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ＦＳＨ￣ＣＴＰꎬｔｈｅｎ ｉｔ ｗａｓ ｐｕｒｉｅｄ ｂｙ ｄｙｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙꎬＤＥＡＥ ａｎｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ. Ｗｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｐｕｒｉｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔꎬｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ (Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ) ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｖｏ (ｏｖａｒｉａｎ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ ｉｎ ｆｅｍａｌｅ ｒａｔｓ ｌａｗ). Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ:Ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆ ＦＳＨ￣ＣＴＰ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ９８％ ａｆｔｅｒｔｈｒｅｅｓｔｅｐｔｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬｔｈｅａｐｐａｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ ｗａｓ ａｂｏｕｔ４７ｋＤａꎬＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ￣ＭＳｒｅｓｕｌｔｗａｓ３５.２ｋＤａ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔｗａｓ４.０~２.８.ＡｎｄｗｅｐｒｏｖｉｄｅｄｔｈｅＦＳＨ￣ ＣＴＰ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＦＳＨ￣ＣＴＰ ｗａｓ ｈｉｇｈ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｏｕｌｄ ｌａｙ ｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇ. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ:ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙꎻＦＳＨ￣ＣＴＰ