流感病毒血凝素茎干部通用疫苗的构建及免疫原性研究construction .pdf

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2016, 24(11): 1764~1770 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2016.11.014 流感病毒血凝素茎干部通用疫苗的构建及免疫原性研究 * 马礼照 刘焕 李桂梅 黄娟 单虎 青岛农业大学动物科技学院/ 山东省高校预防兽医学重点实验室/ 山东省兽药诊断试剂工程技术研究中心，青岛266109 *通讯作者，juanhuang@qau.e 摘 要 为了构建基于血凝素(hemagglutinin , HA)茎干部的流感通用疫苗并研究其免疫原性，本研究以 A/Puerto Rico/8/ 1934(H1N 1)流感病毒为模板，扩增HA 茎干部区域主要蛋白HA2(HA 的344~566 aa)和完 整茎干部HA-stem(缺失53 aa~276 aa 的HA) ，与真核表达载体pCAGGS 连接获得重组质粒。将重组质粒 瞬时转染至HEK-293T 细胞，利用RT-PCR 及间接免疫荧光实验检测其表达情况。将6~8 周龄健康雌性 BALB/c 小鼠(Musmusculus) 分为4 组，即2 个重组质粒组及pCAGGS 质粒对照组和磷酸盐缓冲液 (phosphate buffer saline, PBS)对照组，分别于0 和30 d 免疫2 次，在免疫当天(第0 天)及免疫后第60 天采集 小鼠眼眶血，测定其HI 抗体、细胞中和抗体和IFN-γ水平。结果表明，成功构建了重组质粒pCAGGS- HA2 和pCAGGS-HA-stem ，且重组质粒转染HEK-293T 细胞后均能检测到目的蛋白及其mRNA 。免疫后 第60 天pCAGGS-HA2 和pCAGGS-HA-stem 免疫组对A/Puerto Rico/8/ 1934(H1N 1)病毒的HI 抗体效价均 为5 log2 ，中和抗体效价分别为1∶27 和1∶24 。对异源病毒A/Chicken/Hebei/4/2008(H9N2)病毒的HI 抗体 效价分别为3 log2 和6 log2 ，中和抗体效价分别为1∶24 和1∶22 。pCAGGS-HA2 和pCAGGS-HA-stem 组 INF-γ含量分别为(2362.40±98.24) ng/L 和(2497.06± 120.44) ng/L 。pCAGGS-HA2 及pCAGGS-HA-stem 诱 导产生的抗体及INF-γ水平与免疫前及对照组相比差异显著(P＜0.05) 。结果表明，pCAGGS-HA2 和 pCAGGS-HA-stem 能够诱导对异源病毒的交叉反应，有望作为候选的流感通用疫苗。 关键词 流感病毒，血凝素蛋白，茎干部，通用型疫苗 中图分类号 S85 文献标识码 A Construction and Immunogenicity of Universal Influenza Vaccine Based on Hemagglutinin Stem Region MA Li-Zhao LIU Huan LI Gui-Mei HUANG Juan* SHAN Hu Engineering Research Center of Veterinary Medicine and Diagnostic Reagents of Shandong Province/Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine in Universities of Shandong, College of Animal Science Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, 266109, China * Corresponding author, juanhuang@ Abstract In order to construct a Hemagglutinin- stem based universal vaccine and inves