- 1、本文档共92页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
the key of prokaryotic protein expression and purification - 全式金
The key of Prokaryotic protein
expression and purification
北京全式金生物技术有限公司
☏:400-898-0321
上篇 原核表达
• 原核表达概述
• 原核表达策略选择
• 表达结果验证
• 常见问题与实验例
原核表达概述
原核表达原理概述
表达载体
表达菌株
表达条件
原核表达原理概述
目的基因
构建 转化 培养,诱导
表达载体 重组载体
表达菌株
“基因——载体——菌株——培养”
表达载体
• 启动子
• 融合标签
• 常用表达载体系统
常见启动子
• λ 启动子: 热诱导启动子
pL
• trp启动子: 化学诱导启动子
• trc启动子: trp+lac杂交启动子
• tac启动子: trp+lacUV5杂交启动子;
pGEX (Pharmacia)、pMal (NEB)
•T7/T7lac启动子: pET (Novagen)、pEASY-E1/E2 (Transgen )
T7启动子
T7lac启动子
融合标签
• 常用于蛋白检测与纯化。
• 有时也可增加蛋白可溶性、将蛋白运转至特定位置。
N端融合: 易于构建。终止密码子来自载体/基因
表达量高
提前终止会干扰纯化
二级翻译起始不影响纯化
C端融合: 构建时注意避免移码
基因不能自带终止密码子
提前终止不影响纯化
二级翻译起始会干扰纯化
常用融合标签
• His·Tag pET系统
• GST·Tag pGEX系统
• MBP·Tag pMal系统
常用表达载体系统
系统名称 公司 启动子 抗性 常用标签 特点
pGEX GE tac Amp GST·Tag 可溶性表达,纯化难以控制,谷
(Pharmacia) 胱甘肽 一步洗脱,得到的蛋白纯
度较低,通常需要去掉GST·Tag
pMal NEB tac Amp MBP·Tag 可溶性表达,纯化难以控制,麦
芽糖一步洗脱,得到的蛋白纯度
较低,通常需要去掉MBP·T
您可能关注的文档
- 醇的氧化反应.ppt
- 金鱼tgf2转座酶的原核表达及其dna结合活性 - 上海海洋大学学报.pdf
- inulin fructotransferase concentration by ultra - 食品工业科技.pdf
- 植物-生物膜氧化沟中不同形态铁及根表铁膜与除磷 - ingenta connect.pdf
- 第3讲生命活动的主要承担者——蛋白质 1.生物体中组成蛋白质的 .ppt
- 应用液相色谱质谱联用技术进行中药质量控制元 - 世界科学技术—中 .pdf
- 都兰花岗岩锆石shrimp 定年及柴北缘超高压带花岗岩年代学格架.pdf
- spojené království velké británie a severního irska.ppt
- idt mirna inhibitors - 北京博尔迈生物技术有限公司.pdf
- 药剂真空预压法处理工程废浆试验 - dc-world-中国强夯网.pdf
- 福建省上杭县2023-24年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》资格考试必背100题真题题库带答案.docx
- 福建省上杭县2023-24年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试必刷100题大全含答案(巩固).docx
- 中国近现代史重要事件与人物知识测试.doc
- 福建省上杭县2023-24年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试必刷100题大全含答案(巩固).docx
- 福建省上杭县2023-24年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试必刷100题题库大全(B卷).docx
- 福建省上杭县2023-24年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试必刷100题题库大全(B卷).docx
- 2024届江西省上饶市广信区广信区第七中学物理九上期末联考试题含解析.doc
- 福建省上杭县2023-24年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试必刷100题题库大全(B卷).docx
- 福建省三元区2024年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试必背100题题库及答案【典优】.docx
- 福建省上杭县2024年《一级注册建筑师之建筑物理与建筑设备》考试内部题库(巩固).docx
文档评论(0)