长牡蛎精子超低温冷冻后超微结构损伤研究 - 水生生物学报.pdf

第 41 卷 第 1 期 水 生 生 物 学 报 Vol. 41 , No . 1 2 0 1 7 年 1 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA J a n . , 2 0 1 7 doi: 10.7541/2017.28 长牡蛎精子超低温冷冻后超微结构损伤研究 1, 2 1, 3, 4 1, 3, 4 2 1, 3, 4 韩龙江 刘清华 许 飞 温海深 李 军 (1. 中国科学院海洋研究所, 中科院实验海洋生物学重点实验室，青岛 266071; 2. 中国海洋大学, 青岛 266009; 3. 海洋生态养 殖技术国家地方联合工程实验室, 青岛 266071; 4. 青岛海洋科学与技术国家实验室， 海洋生物学与生物技术功能实验室 青岛 266237) 摘要: 采用程序降温仪分步降温冷冻保存长牡蛎(Crassostrea gigas)精液, 并用扫描电镜、透射电镜研究了精 子的超微结构损伤。超低温冷冻保存后长牡蛎精子的运动率、受精率及孵化率与鲜精无显著差异。鲜精中 84.5%的精子形态结构正常, 冻精中73% 的精子形态结构正常。形态结构正常的精子表现为顶体、质膜、线 粒体与鞭毛结构完整、染色质形状规则, 顶体、线粒体及中心粒结构正常, 鞭毛形态完整、微管结构清晰; 形 态结构异常的精子表现为顶体脱落、解体, 精子头部质膜膨胀、破裂、染色质肿胀、破裂、解体, 线粒体移 位、脱落、膨胀, 嵴退化或消失, 鞭毛弯折、断裂, 微管解聚。结果显示, 以10% DMSO为抗冻保护剂, HBSS溶液为稀释液, 1 鲶4 的稀释比例, 添加海藻糖, 采用分步降温法冷冻保存, 对长牡蛎精子具有较好的抗冻 保护作用, 合适的冻存方法可以有效的保护太平洋牡蛎精子冷冻过程中结构损伤。研究有助于长牡蛎种质资 源的收集保存及应用。 关键词: 长牡蛎; 精子; 扫描电镜; 透射电镜; 超微结构 中图分类号: S917 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2017)01-0220-08 检测精子超低温冷冻保存前后超微结构损伤 陆、中国台湾地区、韩国等, 常栖息在潮间带及浅 已被应用于真鲷(Pagrosomus major )[ 1] 、 中华鲟 海的岩礁海底, 在我国养殖范围十分广泛, 经济价 (Acipenser sinensis )[2] 、大黄鱼(Pseudosciaena cro- 值较高。最近一段时间, 随着我国海水养殖业的不 cea)[3] 、太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)[4] 、 虾夷扇 断发展, 长牡蛎养殖规模呈不断增大趋势, 累代养 贝(Patinopecten yessoensis)[5] 、太平洋鳕(Gadus macro- 殖与近亲交配的加剧, 不可避免地造成了长牡蛎种 cephalus) [6] 、香港巨牡蛎(Crassostrea hongkonge- 质退化的现象, 开展长牡蛎精液的超低温冷冻保存 [7]