胰蛋白酶定向固定化亲和配基的理性设计 - acta phys chim sin.pdf

物理化学学报(Wuli Huaxue Xuebao) February Acta Phys. -Chim. Sin . 2013, 29 (2), 439-448 439 [Article] doi: 10.3866/PKU.WHXB201211272 胰蛋白酶定向固定化亲和配基的理性设计 白 姝 周 荣 刘夫锋* (天津大学化工学院生物工程系, 天津300072; 天津大学, 系统生物工程教育部重点实验室, 天津300072) 摘要: 在胰蛋白酶三维(3D)结构的基础上, 首先利用分子对接从ZINC 数据库中筛选获得了与胰蛋白酶具有 较高亲和性的小分子配基2-硝基苯基-β-D-葡糖苷, 并分析了该配基与蛋白质之间的相互作用力主要为范德华 和氢键相互作用. 并利用分子动力学模拟进一步验证了2-硝基苯基-β-D-葡糖苷与胰蛋白酶之间具有较强的亲 和作用. 分子动力学(MD)模拟结果表明, 配基- 目标蛋白质之间形成稳定的复合物且它们之间的距离基本没有 变化. 此外, 一个水分子通过氢键在配基和目标蛋白质的结合腔之间架桥. 最后制备了偶联有该配基的亲和载 体, 进行了胰蛋白酶的定向固定化, 并考察了该固定化酶的活性. 研究结果表明, 利用修饰2-硝基苯基-β-D-葡 糖苷配基的亲和载体固定化胰蛋白酶的酶活达到340.8 U ·g-1, 比活达到300.3 U ·mg-1, 分别是未修饰亲和配 基载体的10倍和5 倍, 具有明显的优势. 上述结论证明了结合分子对接和分子动力学模拟理性设计定向固定 化亲和配基的方法是可行的, 具有一定的理论和实用价值. 关键词: 酶催化; 亲和配基; 分子对接; 分子动力学模拟; 定向固定化 中图分类号: O641 Rational Design of Affinity Ligand for the Oriented Immobilization of Trypsin BAI Shu ZHOU Rong LIU Fu-Feng* (Department of Biochemical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, P. R. China; Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education, Tianjin University, Tianjin 300072, P. R. China) Abstract: Based on the three-dimensional (3D) structure of trypsin, 2-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside was selected from the ZINC database to be a candidate affinity ligand for trypsin. The affinity between trypsin and the ligand was analyzed. It is found that the interactions between the ligand and the protein are dominated by van der Waals