胰蛋白酶消化强度优化获得高纯度体外培养的星形胶质细胞 - 生理学报.pdf

生理学报Acta Physiologica Sinica , February 25, 2015, 67(1): 103–109 103 DOI: 10.13294/j.aps.2015.0012 实验技术 胰蛋白酶消化强度优化获得高纯度体外培养的星形胶质细胞 靳辉，杨蓬勃，冯改丰，贾 宁，杨维娜，王唯析* 西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系，西安 710061 摘 要：本文旨在观察胰蛋白酶消化对体外培养的星形胶质细胞纯度的影响，优化星形胶质细胞培养方法。常规分离新生 Sprague Dawley (SD) 0.25% 20 30 40 min 大鼠大脑皮质，分别用 胰蛋白酶消化 、 和 制备单细胞悬液并接种细胞。细胞长满瓶底 时进行恒温摇床振荡，前两个不同消化时间组再分为常规消化的对照组和二次胰蛋白酶消化组进行传代纯化。倒置相差显 微镜观察细胞生长情况，MTT法检测细胞增殖，GFAP免疫荧光分析星形胶质细胞纯度并观察其形态，流式细胞术分析细胞 20 min 9 d 30 min 凋亡。结果显示，胰蛋白酶消化 的细胞在原代培养 长满瓶底。而延长胰蛋白酶消化时间至 ，细胞增殖更快， 7 d (70.2 ± 4.0)% 20 min (P 0.05) 40 min 培养 即可铺满瓶底，且星形胶质细胞形态正常，纯度达 ，较 组有显著性提高 。 组虽然 星形胶质细胞纯度也较20 min组有所提高，但细胞增殖缓慢且损伤明显。在恒温摇床振荡结束后，进行二次胰蛋白酶消化可 (P1) GFAP 30 min + 减少传代后杂细胞数量。二次胰蛋白酶消化组第一代 的 阳性率普遍高于各自对照组，其中 二次胰蛋白酶 GFAP (98.1 ± 1.7)% 20 min + P3 消化组 阳性率为 ，相当于 对照组 水平，且二者的凋亡率无显著性差异。以上结果表明，胰蛋 30 min + 白酶消化 二次消化能有效提高星形胶质细胞纯度，缩短原代培养及纯化时间，是体外快速获得高纯度星形胶质细胞 的有效方法。 关键词：星形胶质细胞；细胞培养；胰蛋白酶 中图分类号：Q25 Optimization of trypsin digestion intensity to obtain high-purity in vitro cultured astrocytes * JIN Hui, YANG Peng-Bo, FENG Gai-Feng, JIA Ning, YANG Wei-Na, WANG Wei-Xi Department of Human Anatomy and Histo/Embryology, Xi’an Jiaotong University College of Medicine, Xi’an 710061, China Abstract: The aim of the present study was to o