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2011 Vol.01 創世紀 創世紀 Biogenesis Biogenesis Newsletter 重組蛋白純化 — 親和層析法簡介 2 超便利的蛋白質電泳預鑄膠片 — RunBlue gels 12 超快速的蛋白質染劑 — InstantBlue 15 蛋白質定量試劑 — Bradford Ultra 16 幫你的蛋白質穿上防護衣 — NVoy 技術 18 NVoy應用於蛋白質的 refolding process — NVoy Refold TM Kit 20 NVoy應用於蛋白質的純化及分析過程 — NVoy Stabil-PAC TM Kit 21 創世紀生物有限公司 服務信箱： service@.tw 服務專線： 0800-211-667 台北 02 台中 04 高雄 07-3422370 花蓮 03-8463953 竹南 037-687493 法 析 層 和 親 ︱ 化 純 白 蛋 組 重 重組蛋白純化—親和層析法簡介 由於基因重組技術的進步，越來越多研究者試圖將特定基因選殖至表現載體，並大量表現重組 蛋白；但是不論以何種宿主細胞內除了重組蛋白質以外，仍有上千種以上細胞使用的蛋白質，因此 在收集粗蛋白後的首要工作，就是面對將重組蛋白由粗蛋白中純化出來的問題。 一般純化蛋白值的 方式包括了鹽溶鹽析、膠體過濾、離子交換、親和層析等方法，而親和層析法正是廣泛應用於一般 實驗室甚至工業級純化常用的的蛋白質純化方法。 親和層析法是利用物質間的親和力強弱，將親和力較強的分子保留在擔體上 並移除親和力較 弱的其他分子。親和層析法常使用固相擔體，常用的擔體為很小的珠子 (silica resin or agarose bead) ， 這些珠子上可以接上特定分子，例如螯合物或是 glutathione ，任何可以抓到重組蛋白質的分子都可 以接到珠子上。在親和層析法中，一定要先找到有親和性配對的分子，例如：抗體和抗原、酵素和 基質、荷爾蒙和接受器、或是金屬離子與特定的標定物(tag) 。以抗體和抗原為例，若將抗體接到珠 子上然後讓樣本流過，則抗體就會將其中所含的抗原抓出來，其他不要的分子就會被沖洗下來，接 下來把所要的抗原溶離下來，就可以得到一定純度以上的抗原。 市面上最常使用的蛋白質純化方式，是先 將His-Tag或 GST-Tag 基因接在重組蛋白質，並 使用 Ni-column或 Glutathione-column 進行重組 蛋白質純化，其廣泛應用的原因如下： 1. 市面上已有相當多內含 His-Tag或 GST- Tag的載體，只要將重組蛋白質基因接在正 確的位置上即可獲得 His-Tag或