白木香asmyc2 蛋白的原核表达与纯化prokaryotic - 药学学报.pdf

662 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 16, 51 (4): 662 667 木香AsMYC2 蛋白的原核表达与纯化 1, 2 1 1 1* 廖永翠 , 徐艳红 , 张 争 , 魏建和 (1. 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193; 2. 江西中医药大学基础医学院转化医学中心, 江西 南昌 330004) 摘要: MYC2 转录因子属于 bHLH 转录因子家族中重要的一员, 它是植物茉莉酸 (JA) 信号途径中的核心 调控元件之一, 但在白木香中研究甚少。本实验以白木香叶片中分离的总RNA 为模板, 通过 RT-PCR 方法获得 AsMY C2 基因的编码区 (CDS) 全长, 利用基因重组技术构建pGEX-4T-1-AsMYC2 原核表达载体, 并进行酶切和 测序鉴定, 将鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21 (DE3), 在37 ℃下0.1 mmol ·L 1 异丙基硫代 -D-半乳糖苷 (IPTG) 诱导4 h, AsMYC2 蛋白的表达量最高, 且主要为可溶性蛋白。利用谷胱甘肽亲和介质进行融合蛋白的纯化, 最 后应用 SDS电泳和Western blotting 鉴定融合蛋白。结果表明, 成功构建了pGEX-4T-1-AsMYC2 原核表 达载体, 诱导了GST-AsMYC2 (谷胱甘肽巯基转移酶-AsMYC2) 融合蛋白的表 并进行了蛋白的纯化。高质量的 GST-AsMYC2 融合蛋白的获得, 为多克隆抗体的制备提供材料基础, 为筛选其互作蛋白因子和研究基因功能奠 定基础。利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR) 技术对该基因进行组织表 特异性分析, 结果显示AsMY C2 基因在 沉香形成的主要部位根和茎中的表达量最高, 在叶中的表 量最低; 该结果提示该基因可能与白木香中沉香的 形成有关。 关键词: GST-AsMYC2; 白木香; 载体构建; 蛋白表 与纯化; 组织表 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 16) 04-0662-06 Prokaryotic expression and purification of Aq uilaria sinensis (Lour.) Gilg AsMYC2 protein 1, 2 1 1 1* LIAO Yong-cui , XU Yan-hong , ZHANG Zheng , WEI Jian-he (1. Institute of Me dicinal Plant Development, Chinese Ac ademy of Medical Sciences and Pekin