2008年1期 - 中科院抗体中心.pdf

目　录 【抗原抗体专题】 1 酵母表达系统的研究进展及应用 1 病毒研究领域的新秀—假病毒系统应用的进展介绍 5 抗体库筛选技术中的两大主力军—噬菌体抗体库和核糖体展示技术 8 治疗性全人抗体技术发展趋势 12 抗体亲和力测定 14 【封面故事】 17 1 型糖尿病免疫治疗研究进展 17 【市场资讯】 20 免疫诊断产品应用及产业现状 20 抗体标记进展与新技术 23 单克隆抗体药物的必威体育精装版进展 26 【新闻快讯】 28 美艾滋病疫苗临床试验失败 28 【午茶时间】 30 免疫技术小贴士 30 本期特别推荐抗体清单 31 抗体研究快报 (2008年第1期) 抗原抗体专题 酵母表达系统的研究进展及应用 利用基因工程技术获得有重要生物学活性的蛋白质是现代生物技术的重要目标。在体外表达蛋白质， 重要的是在努力提高表达量的同时，最大限度地保持产物的空间结构和生物学活性与天然蛋白一致。为 此人们建立了大肠杆菌、杆状病毒、哺乳动物细胞和酵母四大外源基因表达体系以适应各种来源的蛋白 质在体外高效表达。大肠杆菌系统具有产量高、成本低、生产周期短的特点，但胞内高水平表达的外源 蛋白大多以不溶解、无活性的包涵体形式存在，而目前由包涵体中提取高水平、高比活的目标蛋白的最 大问题是回收率极低，大部分目标蛋白在复性过程中析出丢失。杆状病毒系统采用先瞬时感染，然后裂 解感染昆虫细胞的方式产生重组蛋白，此系统表达的蛋白折叠正确且被糖基化修饰，但有时糖基化序列 与天然的不同，且蛋白产量不稳定。哺乳动物细胞表达系统生产的蛋白具有天然构象，稳定性好，糖基 化模式没有发生改变，但哺乳动物细胞培养成本高，条件要求严格，蛋白表达水平较低。酵母是低等真 核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单等原核生物的特点，又具有真核生物对表达的蛋白 质进行正确加工，修饰，合理的空间折叠等功能，非常有利于真核基因的表达，能有效克服大肠杆菌系 统缺乏蛋白翻译后加工、修饰等不足，因此酵母表达系统受到越来越多的重视和利用。下面就酵母表达 系统做一简单综述。 1.　酵母表达系统的特点 酵母，一般是指以芽殖为主，形态结构简单的一类真菌，主要分布于子囊菌亚门、担子菌亚门和半 知菌亚门。酵母作为一种单细胞低等真核生物，培养条件普通，生长繁殖速度迅速，能够耐受较高的流 体静压，用于表达基因工程产品时，可以大规模生产，有效降低了生产成本。酵母表达外源基因具有一 定的翻译后加工能力，收获的外源蛋白质具有一定程度上的折叠加工和糖基化修饰，性质较原核表达的 蛋白质更加稳定，特别适合于表达真核生物基因和制备有功能的蛋白质。某些酵母表达系统具有外分泌 信号序列，能够将所表达的外源蛋白质分泌到细胞外，因此很容易纯化。 应用酵母表达系统生产外源基因的蛋白质产物有时也有不足之处，如产物蛋白质可能出现不均一、 信号肽加工不完全、内部降解、多聚体形成等，造成表达蛋白质在结构上的不一致。解决内部降解的方 法有三：一是在培养基中加入富含氨基酸和多肽的蛋白胨或酪蛋白水解物，通过增加酶作用底物来缓解 蛋白水解作用；二是将培养基的pH 值调成酸性(酵母可在pH3.0~8.0 的范围内生长) ，以抑制中性蛋白酶 的活性；三是利用蛋白酶缺失酵母突变体进行外源基因的表达。另外，酵母表达系统还时常遇到表达产 物的过度糖基化情况。因此，表达系统应根据具体情况作适当的改进。 2.　几种常用酵母表达系统(宿主—载体系统) （1）酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达系统 酿酒酵母难于高密度培养，分泌效率低，几乎不分泌分子量大于30 kD 的外源蛋白质，也不能使所 表达的外源蛋白质正确糖基化，而且表达蛋白质的C 端往往被截短。因此，一般不用酿酒酵母做重组蛋 白质表达的宿主菌。酿酒酵母本身含有质粒，其表达载体可以有自主复制型和整合型两种。值得注意的 是，酿酒酵母表达的外源蛋白质往往被高度糖基化，糖链上可以带有40 个以上的甘露糖残基，糖蛋白的 核心寡聚糖链仅含有末端1, 3 甘露糖，产物的抗原性明显增强。所以，酿酒酵母常常用来制备亚单位疫 苗(如HBV 疫苗、口蹄疫疫苗等) 。 1 抗体研究快报 (2008年第1期)