从异常核型人胚胎干细胞中筛选不同x染色体失活状态的亚系.pdf

第２６卷第２期 激　光　生　物　学　报 Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．２ 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 ２０１７年４月 ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ Ａｐｒ．２０１７ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１７．０２．０１１ 从异常核型人胚胎干细胞中筛选不同  Ｘ染色体失活状态的亚系 １ １，２ ２ 邓磊玉 ，林　戈 ，卢光 （１．中南大学基础医学院湖南长沙４１００１３；２．国家干细胞工程中心，湖南长沙４１０２０５） 摘　要： 目的：从异常核型人胚胎干细胞系中分离两种不同Ｘ染色体失活（ＸＣＩ）状态的细胞，建立亚系，并进 行对其ＸＣＩ状态特征和多能性标记进行鉴定。方法：Ｇ显带鉴定人胚胎干细胞系ｃｈＨＥＳＣ３早晚期代数细胞的 核型，Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３免疫荧光染色鉴定早晚期ｃｈＨＥＳＣ３表观遗传差异，ＲＴＰＣＲ检测早晚期ｃｈＨＥＳＣ３中ＸＩＳＴ基 因的表达。利用单细胞克隆的培养分选亚系，Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３、ＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ 以及 ＤＡＰＩ三种标记的共染后每种 Ⅱ 表观标记各选两株进行ＲＴＰＣＲ，检测两种亚系中ＸＩＳＴ基因的表达。并对这四株细胞进行干细胞标记鉴定。结 果：Ｇ显带结果证明早期ｃｈＨＥＳＣ３为正常核型，晚期代数核型为异常核型，牵涉到８条染色体的复杂结构变异。 Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３免疫荧光染色证明异常核型ｃｈＨＥＳＣ３中有部分细胞出现了Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３凝集点，而正常核型细胞中 未发现。正常核型细胞（ｃｈＨＥＳＣ３Ｎ）没有ＸＩＳＴ基因表达，异常核型细胞（ｃｈＨＥＳＣ３Ｃ）中有表达。在ＲＮＡｐｏｌｙ ｍｅｒａｓｅ 着色缺口中发现 Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３凝集点的细胞亚株ＸＩＳＴ基因表达阳性，ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ 着色缺口中未发现 Ⅱ Ⅱ Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３凝集点的细胞亚株ＸＩＳＴ基因表达阴性，ＸＩＳＴ阳性和阴性细胞各选两株进行多能性标记免疫荧光染 色均为阳性。结论：成功从异常核型人胚胎干细胞系中分离两种不同ＸＣＩ状态的细胞并建立亚系，两种表观类 型的亚系均保持多能性标记并能在长期培养中保持各自特性。 关键词： 人胚胎干细胞；异常核型；表观遗传；单细胞克隆；ＸＩＳＴ 中图分类号： Ｑ８１３．１ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７７１４６（２０１７）０２０１５６０６ ＤｅｒｉｖａｔｅＳｕｂｌｉｎｅｓｗｉｔｈ／ｗｉｔｈｏｕｔＸＣＩＭａｒｋｅｒｓｆｒｏｍｈＥＳＣｓｗｉｔｈ ＡｂｎｏｒｍａｌＫａｒｙｏｔｙｐｅ １ １，２ ２ ＤＥＮＧＬｅｉｙｕ，ＬＩＮ