［应用纪要］ 血清中蛋白药物多反应监测定量的胰蛋白酶消化 - waters.pdf

［应用纪要］ ［应用纪要］ 血清中蛋白药物多反应监测定量的胰蛋白酶消化流程的优化 、 、 、 和 Catalin Doneanu Hua Yang Paul Rainville Ed Bouvier Robert Plumb 沃特世公司 （美国马萨诸塞州米尔福德） 方案优势 引言 胰蛋白酶消化的分析流程可以进行优化 使用蛋白酶解多肽替代蛋白药物进行质谱定量分析是明智的选择。对 开发出成功的多反应监测 （ ）分析方 生物体液中 （例如血清、血浆和尿液）蛋白药物定量遇到的挑战之一 MR M 法。方法具有更高的灵敏度，更短的样品 就是如何为每个待分析蛋白找到适合的内标物质。同位素标记的蛋白 1-3 制备时间以及更高的分析重现性。 标准品已经成功用于单克隆抗体的定量 ，但是，这些标准品价格昂 贵并且其生产会耗费大量的时间。 由于蛋白质的定量是在肽水平上进行的，另一种替代方法是使用较便 4- 7 宜的同位素标记的肽作为内标 。出于对胰消化效率的考虑，2004年 引入了13 15 5 。 C N - 同位素标记的可分解肽 （加长肽） 无论 的性质如何，两种定量方法均依赖于使用特异性的酶 （例如胰蛋 IS 白酶、 ）对蛋白样品进行消化。蛋白质的消化已经是一个公认的 Lys C 4-9 分析流程中差异的主要来源 ，这种流程必须进行精心优化。此外， 当使用整体消化法时，即将肽内标用于定量，就会产生另外一个问题, 即在生物基质存在的情况下，治疗性蛋白质和同位素标记的肽内标的 酶解效率是否相同。 本应用对胰蛋白酶消化方法进行了优化，以便开发出成功的多反应监 测 （ ）分析方法。一般而言，胰蛋白酶消化优化的目的是为了得 MR M 到更高的分析灵敏度、更短的样品制备时间和更高的分析再现性。 沃特世提供的解决方案 这里，我们使用了一种单克隆抗体药物，用于研究胰蛋白酶相对于整 ACQUITY UPLC® I-Class系统