人骨肉瘤细胞适配体的早期筛选 - 北华大学学报.pdf

第16卷 第3期 北华大学学报(自然科学版) Vol.16 No.3 2015年6月 JOURNAL OF BEIHUA UNIVERSITY(Natural Science) Jun.2015 文章编号:1009-4822(2015)03-0311-05 DOI:10.11713/ j.issn.1009-4822.2015.03.007 人骨肉瘤细胞适配体的早期筛选 1 2 3 3 1 3 3 王　 华 ,梁　 骥 ,高　 远 ,孙　 娜 ,马　 艳 ,高丽君 ,夏　 薇 (1.北华大学附属医院,吉林 吉林　 132011;2.吉林大学第一临床学院,吉林 长春　 130021; 3.北华大学医学检验学院,吉林 吉林　 132013) 摘要:目的　 体外随机合成单链寡核苷酸备选文库,以骨肉瘤U-2 OS完整细胞作为靶点,筛选出与其结合的高 特异性、高亲和性单链DNA(ssDNA).方法　 将体外合成随机碱基序列的单链 DNA 文库与人骨肉瘤U-2 OS细 胞相结合,收获与靶细胞结合的单链DNA,通过优化PCR条件进行大量扩增后,应用生物素-链霉亲和素亲和层 析柱分离出正链DNA.结果　 以10,14 以及18个循环时扩增dsDNA产物最理想;应用生物素-链霉亲和素磁珠 分离法制备的正链ssDNA纯度高,可有效保证次级文库的筛选.结论　 应用 Cell-SELEX技术可成功筛选早期 ssDNA文库,为后续获得针对人骨肉瘤U-2 OS细胞的高特异性适配体奠定实验基础. 关键词:人骨肉瘤;Cell-SELEX技术;适配体 中图分类号:R738.1 文献标志码:A 【引用格式】王华,梁骥,高远,等.人骨肉瘤细胞适配体的早期筛选[J].北华大学学报:自然科学版,2015,16(3):311-315. Early Screening of Human Osteosarcoma Cell Aptamer 1 2 3 3 1 3 3 Wang Hua ,Liang Ji ,Gao Yuan ,Sun Na ,Ma Yan ,Gao Lijun ,Xia Wei (1.Affiliated Hospital of Beihua University,Jilin 132011,China; 2.Thefirst hospital of Jilin University,Changchun 130021,China; 3.Inspection College of Beihua University,Jilin 132013,China) Abstract:Objective Prepare single-stranded oligonucleotide (ssDNA) with high affinity and specificity for Osteosarcoma U-2 OS,a target cell,by exponential enrichment strategy.Method The designed single-stranded DNA library were synthesized in vitro. After incubation of DNA library pool with U-2 OS cells,the ssDNAs binding to the target cel