乙肝定量检测意义及新型检测技术的进展.ppt

HBV DNA HBcAb HBsAg HBeAg HBeAb HBsAb 化学发光定量（CLIA）检测HBsAg灵敏度可达0.05-0.1ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是0.5-1.0ng/ml，胶体金（POCT）检测HBsAg灵敏度是1-5ng/ml也就是说只有血清中的HBsAg达到0.5-5ng/ml酶标或胶体金才会呈阳性反应。 ■急性乙肝早期：CLIA定量能及早检出HBsAg，确证HBV感染，几乎能与preS1同时检测，在病程观察中大大缩短“窗口期”时间，而酶标或胶体金在乙肝早期检测往往HBsAg呈阴性。 ■慢性乙肝：一些患者由于机体对HBV包膜蛋白(HBsAg)表达较低，酶标或胶体金检测可出现HBsAg和抗-HBs均阴性的情况，而CLIA技术则可避免这些情况的出现，为正确判断病情提供依据 。 ■病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA或胶体金测不出抗原，而CLIA定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能同时检测出HBsAg和抗-HBs。 注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs浓度的定量分析）： 全程（3针）免疫结束后1个月检测保护性抗-HBs的浓度，据此值将乙肝疫苗接种者分为四种情况： （1）无应答者：抗体浓度小于1mIU/ml，无抗体产生或非特异性结合反应，约占接种者的5%，继续加大剂量或更换疫苗厂家全程（3针）免疫注射； （2）低应答者：抗体浓度为1-10mIU/ml，保护作用比较弱，约占接种者的10%，须加强两针疫苗注射； （3）中应答者：抗体浓度为10-100mIU/ml，已有一定的保护力，约占接种者65%，须加强一针疫苗注射； （4）高应答者：抗体浓度大于100mIU/mI，免疫效果最好，约占接种者20%，不需要加强注射。 因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。 FQ-PCR-DNA与HBeAg定量检测相关性分析 PCR基本知识： 1、反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 2、PCR反应条件为温度、时间和循环次数（变性温度与时间为93℃～94℃lmin ；退火与延伸(复性)温度与时间 ； 55℃ 2min； 循环次数：40次 3、PCR反应步骤：变性，退火和延伸 4、假阳性和假阴性 5、血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态 6、不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态 结合PCR诊断病情 HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各项指标定量变化更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均还较高，提示并未完全痊愈，有可能病毒再次出现复制状况，尚须密切关注。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均很低或阴性并持续一段时间，提示可能完全痊愈，预后疗效良好。 （1）定量分析HBsAg和抗-HBs的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。如HBsAg浓度降低，抗-HBs的浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展。反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而抗-HBs一直处于较低水平，则容易发展为慢性乙肝或乙肝病毒携带者。在急性HBV恢复期中约有3%的个例可同时检出低水平HBsAg和抗-HBs，然后HBsAg消失而抗-HBs水平渐增高。 （2）定量分析HBeAg和抗-HBe的浓度变化，可以反映病情变化和治疗效果。定量测定能明确检测HBeAg向抗-HBe转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和抗-HBe浓度升高的过程。高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的抗-HBe一方面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关，应进一步结合肝功生化指标如ALT、AST、BIL等进行综合判定。 （3）抗-HBc浓度的高低可以反映病毒感染的状态。高浓度的抗-HBc提示乙肝急性或现行感染，常与HBsAg并存，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-HBc持续高浓度。而低浓度的抗-HBc一般为恢复期或既往感染，常于抗-HBs并存，无肝损害或肝损害早已静息。 （4）急性乙肝一般会在六个内病情缓解，甚至自愈。病情超过六个月仍未缓解者，多转为慢性化，但通过五项联合定量分析，再结合肝功指标和HBV DNA的水平，即若表现为HBeAg下降、抗-HBe出现或渐升，HBsAg和HBV DNA血清水平降低，这是病变恢复的时相，可望在1-2年病毒被清除而疾病痊愈；若HBeAg和HBV DNA 血清水平持续很高的病人，预期可能保留慢性无症状携带（AsC）或慢性乙型肝炎。 三.