转移性人肝癌类组织体模型的建立 - 生物化学与生物物理进展.pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(8): 864~870 移性人肝癌类组织体模型的建立* ** ** *** 唐建华 崔杰峰 刘银坤 (复旦大学附属中山医院肝癌研究所，上海200032) 摘要 为了探讨三维培养状态下人肝癌细胞的生物学特征和转移潜能，利用旋转壁式生物反应器(rotating wall vessel, RWV)结 合生物支架材料，将高转移性人肝癌细胞(MHCC97H)成功地构建成一种新的转移性人肝癌类组织体模型，针对肝癌细胞的 临床病理特征，一系列体外和体内实验包括组织形态、显微结构、蛋白质产生和分 、葡萄糖代谢、组织特征基因表达、细 胞的生长和凋亡，以及在裸鼠中的成瘤性和转移性等对模型进行检测评估，结果均显示，该模型能较好地模拟转移性人肝癌 组织的病理特征，且优于单层培养的人肝癌细胞，该模型可能对肝癌转移分子机制探讨、抗癌药物筛选以及肝癌动物模型建 立产生积极的推动，同时也表明肝细胞癌(HCC)细胞的立体形态结构对维持肝癌细胞生物学功能十分重要 关键词 肝细胞癌，转移，模型，旋转壁式生物反应器 学科分类号 R73 ，Q81 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 10.00052 肝细胞癌(HCC)是第六种最常见的恶性肿瘤， 培养细胞生物学功能的局限，迫切需要建立三维体 是 亡率位居第三的癌症，每年有将近600 000 人 外类组织模型来弥补两维细胞模型的不足，为较全 于HCC[1-2] 目前已有大量基于肝癌细胞平面培 面阐明HCC 转移机制提供理想研究平 本研究 [3-4] 养的HCC 研究报道 ，这些研究多采用贴壁平面 使用乳酸- 羟基乙酸共聚物(PLGA)支架和旋转壁式 培养方法，然而平面培养的细胞存在缺乏组织样结 生物反应器(RWV) ，在三维培养环境 中将 构、细胞间相互作用、细胞与基质相互作用等一些 MHCC97H 细胞成功地构建成一个转移性HCC 类 [5-6] 局限性 ，还有可能丢失或者改变癌症组织状态 组织体模型，并对三维状态下肝癌细胞的生物学功 下细胞的部分重要生物学特征[7-9] 三维培养技术 能进行探讨 能较好地克服上述平面培养中遇到的问题，较理想 1 材料和方法 地模拟肿瘤组织的结构和功能，在体外癌症机制研 究中有良好的应用 美国国家航空航天局发明的旋 1.1 PLGA 支架的准备和应用 转壁式反应器(RWV)作为新型三维培养系统，在维 PLGA 支架(Synthecon，Houston，TX，USA) 持细胞间相互作用和组织样结构形成方面具有明显 75% 乙醇过夜灭菌，PBS 洗3 次在三维培养时放入 [10-11] 4 mm 4 mm 1 mm 的PLGA 支架于RWV 生物 优势，在肿瘤细胞生物学研究中逐渐获得应用 , 但在三维培养状态下肝癌细胞转移分子机制研究目 反应器. 前尚未见报道 高转移性人肝癌细胞MHCC97H 是 旦大学 附属中山医院肝癌研究所建立的用于HCC 转移机 * 国家自然科学基金 和上海市浦江人才计划(A 类， 制研究的细胞模型，在过去8 年中，该细胞模型不 08PJ 1403000)资助项目. 仅促进了HCC 转移关联基因和蛋白质的发现，也 ** 共同第一作者. *** 通讯联系人. 为研究微环境对HCC 侵袭的影响以及HCC 转移 Tel: 0