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优化的glycoworks hilic spe流程用于mab型样品中n-糖的 - 仪器谱.pdf

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优化的glycoworks hilic spe流程用于mab型样品中n-糖的 - 仪器谱

[ 应用纪要 ] 优化的GlycoWorks HILIC SPE流程 用于mAb型样品中N-糖的定量与稳定回收 Matthew A. LauberStephan M. Koza 和 Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 简介 1,2 ■ GlycoWorks HILIC µElution提取板提供了 据估计,所有蛋白质中有一半以上都经过糖基化 。这一翻译后修饰 一种高效的多聚糖纯化装置 3 涉及寡糖的连接,其在许多生物过程中发挥着重要作用 。治疗性抗体 是一类受糖基化影响突出的蛋白质,此类抗体中多聚糖图谱的改变可 ■ 采用优化的SPE条件定量并一致性地 能导致其效能和免疫原性出现明显降低。因此,治疗性抗体的多聚糖 回收不同范围内的N-糖 图谱在细胞系选育过程中通常被作为关键性质量属性(CQA)进行评估, 并且在开发和批量放行过程中必须进行监测。 ■ 优化的SPE条件具有出色的方法稳定性 一套用于评价糖蛋白中N-糖的高效分析平台包括:通过PNGase F释放出 ■ 可采用2-AB标记的多聚糖标准品确保 多聚糖,采用具有荧光活性的2-氨基苯甲酰胺(2-AB)进行标记,然后采 样品制备和分析方法的性能 用亲水作用色谱法(HILIC)进行分离,最后由荧光检测器(FLR)进行检测, 3-10 如图1所示 。 变性 采用PNGase F 糖蛋白 还原 进行去糖基化 释放的N-糖+蛋白质 烷基化 HILIC SPE 沃特世解决方案 GlycoW orks™ GlycoWorks试剂盒* GlycoWorks HILIC µElution 对照标准品 (RapiGest™ SF,IAM和DTT) 提取板或 ®

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