新型双功能融合蛋白gad的peg 马来酰亚胺修饰及其性质研究.pdf

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１７，４８（３）：３５５－３６０ ３５５ 新型双功能融合蛋白ＧＡＤ的ＰＥＧ马来酰亚胺 修饰及其性质研究 陈　琛，李　闻，童　癑，姚文兵 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　为了解决新型双功能融合蛋白ＧＡＤ复性困难、具有免疫原性等问题，采用ＰＥＧ马来酰亚胺修饰变性后的ＧＡＤ包 涵体。通过圆二色谱、色氨酸荧光分析等方法对比修饰前后ＧＡＤ构象变化，并采用ＯＧＴＴ、脂清除实验验证其生物学活性。 研究结果表明，ＰＥＧ马来酰亚胺能够完成变性条件下ＧＡＤ的定点修饰，提高其复性效率，且修饰产物二、三级结构与修饰 前一致；ＰＥＧＧＡＤ的免疫原性降低（Ｐ＜００１），具有显著的降糖降脂作用（Ｐ＜０００１），且体内药效时间延长。此方法可为 强疏水性多肽类药物的开发提供有效策略。 关键词　双功能融合蛋白ＧＡＤ；ＰＥＧ马来酰亚胺；ＰＥＧ修饰；动脉粥样硬化；ＧＬＰ１；球状脂联素 中图分类号　Ｑ８１６　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１７）０３－０３５５－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　陈琛，李闻，童癑，等新型双功能融合蛋白ＧＡＤ的ＰＥＧ马来酰亚胺修饰及其性质研究［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１７，４８（３）： ３５５－３６０ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＣＨＥＮＣｈｅｎ，ＬＩＷｅｎ，ＴＯＮＧＹｕｅ，ｅｔａｌＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍＰＥＧｙｌａｔｅｄｎｏｖｅｌｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＧＡＤａｎｄｉｔｓｐｒｏｐｅｎｔｙ ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１７，４８（３）：３５５－３６０ ＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍＰＥＧｙｌａｔｅｄｎｏｖｅｌｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＧＡＤａｎｄｉｔｓ ｐｒｏｐｅｎｔｙ  ＣＨＥＮＣｈｅｎ牞ＬＩＷｅｎ牞ＴＯＮＧＹｕｅ牞ＹＡＯＷｅｎｂｉｎｇ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｓｏｌｖｅｔｈｅｄｉｆｆｉｃｕｃｔｉｅｓｏｆｒｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｎｅｗｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ＧＡＤ牞ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｉｅｓｏｆＧＡＤｗｅｒｅｍｏｄｉｆｉｅｄｂｙＰＥＧｍａｌｅｉｍｉｄｅＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｍｏｄｉｆｉｅｄＧＡＤ ｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｂｙｃｉｒｃｕｌａｒｄｉｃｈｒｏｉｓｍａｎｄｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ．Ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｖｅｒｉ ｆｉｅｄｂｙｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔａｎｄｌｉｐｉｄｓｃａｖｅｎｇｉｎｇＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰＥＧｍａｌｅｉｍｉｄｅｃｏｍｐｌｅｔｅｄｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｏｉｎｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＧＡＤ牞ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄｉｔｓｒｅｆｏｌｄｉｎｇｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｒｙａｎｄｔｅｒｔｉａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆ ｍＰＥＧｙｌａｔｅｄＧＡＤｗｅｒｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈａｔｏｆＧＡＤＰＥＧＧＡＤｈａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃａｎｄｌｉｐｉｄｌｏｗｅｒｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ牗Ｐ＜０００１牘ｗｉｔｈｌｏｎｇｅｒｈａｌｆｌｉｆｅｉｎｖｉｖｏａｎｄｌｏｗｅｒｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ牗Ｐ＜００１牘Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓｅｆｆｅｃ ｔｉｖｅｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｓｔｒｏｎｇｌｙｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｐｅｐｔｉｄｅｄｒｕｇｓ