h2o2对肺腺癌a549细胞葡萄糖和谷氨酰胺代谢的影响 - tumor - 肿瘤.pdf

324 　　肿瘤2014 年4 月第34 卷第4 期　TUM OR Vol. 34, April 2014 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2014.04.005 Copyright© 2014 by TUM OR Basic Research 基础研究 · H O 对肺腺癌A549细胞葡萄糖和谷氨酰胺代谢的影响 2 2 1 1 1 1 1, 2 俞小凤 ，张　腾 ，黄　辰 ，张　凡 ，黄　钢 1. 上海交通大学医学院附属仁济医院核医学科，上海　200127；2. 上海交通大学医学院健康科学研究所，上海　200025 [摘要]　目的：探讨H2 O2 对肺腺癌A549 细胞中葡萄糖和谷氨酰胺代谢途径依赖性的改变及可能的作用机制。方 法：用不同浓度的H2 O2 处理A549 细胞后，细胞计数试剂盒-8 （cell counting kit-8，CCK-8 ）法检测细胞的存活率； 荧光探针氯甲基-2 ’，7 ’- 二氯二氢荧光素二乙酯 [5- （and-6 ）-chloromethyl-2 ’，7 ’-dichlorofluorescein diacetate, acetyl ester ，CM-H2DCFDA] 染色法检测细胞内活性氧 （reactive oxygen species ，ROS ）的水平；葡萄糖和乳酸 测定试剂盒分别检测细胞中葡萄糖的摄取量和乳酸的产生量；CCK-8 法检测葡萄糖代谢抑制剂2- 脱氧-D - 葡萄 糖 （2-deoxy-D -glucose ，2-DG ）对A549 及H O 处理过的A549 细胞增殖的影响及谷氨酰胺对A549 及H O 处 2 2 2 2 理过的A549 细胞增殖的影响。实时荧光定量-PCR 检测葡萄糖代谢通路和谷氨酰胺代谢通路上相关基因mRNA 表达的变化；蛋白质印迹法检测不同浓度H2 O2 处理后对A549 细胞中异柠檬酸脱氢酶1 （isocitrate dehydrogenase 1，IDH1 ）和IDH2 蛋白表达的影响。结果：低毒性浓度H2 O2 （50 和100 μmol/L ）作用2 h 后，A549 细胞的存 活率未受明显影响，但细胞ROS 水平增高，葡萄糖消耗增加，乳酸生成增高；葡萄糖代谢抑制剂2-DG 对H O 2 2 预处理后的A549 细胞的增殖具有抑制作用，低浓度谷氨酰胺对H O 预处理后的A549 细胞有上调生存率的作用。 2 2 与葡萄糖代谢通路相关基因mRNA 的表达被上调，与谷氨酰胺代谢通路相关基因mRNA 表达被下调，IDH1 和 IDH2 蛋白的表达水平被下调。结论：H2 O2 可上调A549 细胞对葡萄糖代谢通路的依赖性，而下调对谷氨酰胺代 谢通路的依赖性，其作用机制可能与IDH1 和IDH2 蛋白表达的下调有关。