基于黄单胞菌冰核蛋白n端的表面展示体系建立 - 应用与环境生物学报.pdf

2014-06-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.10001 / Chin J Appl Environ Biol 2014 20 ( 3 ) : 351-356 应用与环境生物学报 ， * 基于黄单胞菌冰核蛋白N端的表面展示体系建立 ** 付 玮 李友国 李一星 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室 武汉 430070 摘 要 为了建立一个自主、高效的细菌表面展示体系，利用野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端结构域，将短小芽孢杆菌脂 肪酶展示于大肠杆菌Rosetta 2 (DE3) 表面. 采用细胞分级、脂肪酶活测定和His-tag In-gel stain分析等检测了重组蛋白 pH . 的表达情况，并进一步检测了不同底物、温度、 和有机溶剂对酶活稳定性的影响 结果显示融合蛋白在大肠杆菌细 (74.6 ± 4.5) U/g 19 267 胞外膜成功展示，重组菌脂肪酶活为 冻干细胞，展示水平为每个细胞表面 个脂肪酶分子；展示酶 pH 11.0 40 40 80% 对中长链脂肪酸酯表现出较高的水解活性，最适 为 ，最适温度为 ℃，且在 ℃保温一周仍保持 以上的酶 . N . 7 1 17 活 本研究表明基于野油菜黄单胞菌冰核蛋白 端的展示体系是一种高效、稳定的细菌表面展示体系 图 表 参 关键词 野油菜黄单胞菌；冰核蛋白；细菌表面展示；脂肪酶；大肠杆菌 CLC Q786: Q939.96 Establishment of cell surface display system based on N-domain of ice * nucleation protein of Xanthomonas FU Wei, LI Youguo LI Yixing** State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China Abstract This study aimed to establish an autonomous and efficient bacterial